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실험Q&A    35건 정확도순 날짜순
Q. IP 처음했는데.. 트렌스퍼후 퐁슈 확인하니..마커만 딸랑. ㅠㅠ
헤아릴 정도) 밴드만 있고.. 말 그대로 깨끗한 상태입니다. 트렌스퍼 하고 난 뒤.. 퐁슈로 확인했는데.. 그렇더라구요. 근데..프로토콜 상에서는 아무리 생각해도 잘못은 없는 것 같구요. 혹시 비드가 든 ...
A.  폰슈상에서는 말그대로...깨끗한 상태가 정상입니다..^^ 정도에 따라다르겠지만..약하게라도..antibody의 Heavy chain과 light chain만 나타나는게...지극히 정상적인 것입니다.^^ 실험은 그냥 익히면..익히는대 ...
답변 4  |  2006.01.26
Q. 웨스턴 장시간 트렌스퍼..
웨스턴 transfer 를 했는데 40V로 20시간 정도 한 것 같아요. 그리고 저 20시간은 power supply가 자꾸 에러가 나서 하루하고도 반나절(대략 32시간 정도)에 걸쳐서 transfer를 하였던 시간을 합친거구요. transfer ...
A.  tansfer를 장시간하게 되면 마커색이 흐려집니다. 아마도 SDS 때문인 것으로 생각됩니다. 같은 시간을 tansfer해도 semi 로하는 것에 비해 탱크를 쓰는 경우 마커색이 상당히 흐려집니다. 물론 회사 제품에 ...
답변 2  |  2008.11.20
Q. 낮은 % 의 SDS-PAGE 젤을 트렌스퍼할때 멤브레인에 붙네요 -_-
% 젤을 걸어서 트렌스퍼했는데 나일론 멤브레인에 붙어버렸네요. 이거 떼기가 쉽지 않습니다. 좋은 방법 없을까요? 사이즈가 큰 단백질들을 비교하는거라 4% 젤을 써야합니다. 그레디언트젤은 만들기도 ...
A.  gel이 membrane에 붙다니.... 그럴수도 있군요.... buffer에 담궈놓는 것은 어떨까요? 시간이 흐르면 떨어질것도 같은데요...
답변 5  |  2008.10.15
Q. WB할때 자꾸 멤브레인이 탑니다. 도와주세요 ㅠㅠ
선생님들 웨스턴 블롯 할때 멤브레인이 자꾸 탑니다. 100V에서 30분 돌립니다 트렌스퍼 할때 스티로폼박스에 얼음을 가득 채우고 아이스팩도 넣습니다. 도와주세요 ㅠㅠ
A.  biorad 제품인가요? 아님 invitrogen 제품인가요? Invitrogen의 경우 10-20v로 60정도 걸어줍니다. 100v면 다 타버려요. https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/western-blotting/transfer ...
답변 2  |  2020.04.13
Q. 혹시 웨스턴 버퍼중에 트렌스퍼 버퍼 재사용 하시나요?
저희 랩에서는 웨스턴 과정중에서 트렌스터 할때 1x blotting buffer 를 사용하는데(20% 메탄올) 10x짜리 blotting buffer를 만들고 1x로 만들어 사용하며, 이것을 3번 정도 재사용 합니다. 항상 같은 샘플을 3번 거 ...
A.  몇 번 재사용해도 별 문제 없습니다. loading했던 protein들이 둥둥 떠다닌다 해도 dilution이 엄청 많이 되어서 background가 더 많이 생기거나 둥둥 떠다니던 것들이 band모양으로 차렷!을 한다던지 뭐 이런 문 ...
답변 5  |  2015.01.06
Q. Transfer에서 자꾸 문제가 생깁니다. 도와주세요
염색되고 어느부분은 왜 염색이 안되는건지 그부분이 트렌스퍼가 안된걸로 판단한게 잘못된건지도 궁금합니다. 좋은 답변 ...
A.  1.트랜스퍼 문제로 생각됩니다. 2. 저는 퐁슈염색이 골고루 나오지 않을경우 트랜스퍼 문제라고 생각합니다. 3. (1)저희 연구실 semi dry 조건 20V 100mA 30분 /1장당 20V 100mA 1시간 / 2장. semidry 기기 크기? 넓 ...
답변 2  |  2018.03.21
Q. Western transfer에 대해 여쭙니다.
수 있었습니다. 그래서 궁금한 것은 첫번째, 일반적으로 트렌스퍼를 하면 젤에 있는 단백의 대부분이 맴브레인으로 가는 것이 아닌가요? 그리고 두번째는 혹시 이글을 읽어 보시고 이것을 바꾸어서 ...
A.  transfer시간을 늘리지마시고...줄여보심이 ㅋ 한 30분?? 이유는 20정도 크기면 transfer도 다른거 보다 빠르게 이동할듯하네요 ㅋ 결과 꼭 알려주시고요 ㅋ 더운데 고생하세요~!
답변 1  |  2007.07.03
Q. Western 중 Transfer 과정에서 열이 많이 나는 것 같습니다..
4도씨에서 약 1시간~2시간정도 트렌스퍼를 하는데요.. 트렌스퍼를 막 끝내고 뚜껑을 열면 김이 모락모락 날 정도로 열이 발생하는데 이래도 상관이 없을까요? 제가 웨스턴에서 보는 단백질들이 ...
A.  다른 단백질들이 잘 잡힌다면 transfer의 문제는 아닙니다. 샘플에 존재할 것으로 예측되는 target protein이나 antibody의 문제일 가능성이 많습니다. 100V에서는 열이 많이 발생합니다. 이는 4C에서 하더라도 ...
답변 6  |  2008.08.13
완전기초 웨스턴 방법
쪽으로 즉 젤에서 멤브레이쪽으로 트렌스퍼 된다.) 4.3 트렌스퍼 박스에 넣고 ice pack 도 넣고 cold room 이나 아이스 박스에 얼음 듬뿍넣고. (보통100v 로 두시간 동안 transfer 한다.. ) 5. Antibody 붙이기 (블락, ...
프로토콜
 |  2017.04.14
Q. 웨스턴블럿 전기영동이 이상하게 되요 사진분석 요청  |  첨부파일 첨부파일
웨스턴블럿 트렌스퍼까지 하고 폰슈로 염색했더니 결과가 사진처럼 나왔더라구요.. 갑자기 어제부 ... .. 왜 이렇게 되는지 알고 싶습니다. 같이 로딩하고 트렌스퍼한 다른 멤브레인은 괜찮거든요 ...
A.  저는 보통 저런식으로 나오면 전기영동에 문제가 있다고 판단하지만... 같은 기기에 같은 running buffer를 사용해서 같은 mA(암페어)로 전기영동한 다른 gel을 transfer한 membrane은 제대로 나왔다면 할말이 없 ...
답변 1  |  2016.12.13
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