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실험Q&A    1,740건 정확도순 날짜순
Q. 클로닝했는데 insert가 모두 거꾸로 들어갔네요.
TAPO TA cloning kit를 이용해서 이 kit에 있는 pcR-topo vector 에 클로닝 했는데, 시퀀싱을 해보니 gene이 거꾸로 들어갔네요. 6개의 clonony 모두 거꾸로 들어갔네요. 다시 제대로 넣고 싶은데, 이 gene이 cDNA에서 ...
A.  혹시 mini prep을 몇 개나 하신건가요? 6개 했는데 모두 거꾸로 들어갔다는 것인가요? 어쨌든 transformation 한 plate에서 mini prep을 더 하셔서 PCR을 해보세요.(혹시 colony가 6개만 떴다던지 plate를 버렸다던지 ...
답변 3  |  2012.12.07
Q. 클로닝 쫌 해보신 고수분.. 어디없을까요?
. 뭐가 문제일까요? positive control로 12kb벡터에2kb유전자 클로닝된거 바로 트렌스포메이션 해보니까 colony는 잘뜨는것으로 보아 엔자임컷과 라이게이션의 문제로 예상은 되지만 더 무엇을 바꿔봐야 할지 ...
A.  꼭 필요한 벡터고, 실험실이 그리 궁하지 않다면 Infusion 이나 (클론텍) 유사제품을 이용하셔서 해보세요! 잘안될때 새로운 방법으로 해보는 것도 좋다고 생각합니다!
답변 11  |  2015.06.10
Q. 클로닝 질문입니다 (DNA와 vector의 제한효소)
찾아서 제한효소 서열에 맞는 곳을 따로 증폭해야하나요?.. 클로닝은 처음이라 개념이 잘 안잡혀있는건지도 모르겠습니다..ㅠㅠ (해당 유전자 transfection을 위한 lentiviral vector입니다. 나중에 puromycine으로 ...
A.  혹은 선배 혹은 옆방 선생님께 여쭤보셔야 할것 같습니다. 클로닝용 restriction enzyme 치환은 어려운것이 아니니 주변에 설명해주실분 찾기는 쉬울것 같습니다 ...
답변 3  |  2015.11.10
Q. 클로닝 끝난 벡터에서 자르지 않아도 다른 사이즈 밴드 검출...
안녕하세요. 클로닝이 끝난 벡터 입니다. 시퀀스도 맞구요. 그런데 잘랐을때 다른 사이즈에 밴드가 뜨길래 왜이럴까 싶었는데 그냥 벡터를 자르는거 없이 걸어봐도 그 사이즈에 밴드가 뜨더라구요. ...
A.  보통 벡터 프랩해보면, linear (원래 ladder에서의 예상 사이즈와 일치) 와 circular (예상 사이즈보다 작음: coil 이 풀리면 예상 사이즈보다 크게 나옴 - EtBr) 이렇게 두개의 밴드가 뜨는 것이 통상적 입니다. ...
답변 4  |  2007.11.05
Q. pCMV-SPORT6 클로닝 질문드려요
SPORT6에 들어있는 클론을 샀는데 restriction enzyme으로 잘라서 클로닝을 하려고 하는데 안되고 있어요 att site에 맞춰서 프라이머 짜서 PCR 해야만 되는건가요? 그냥 enzyme으로 잘라서 넣어주면 안되는건가요 ...
A.  보통 잘라서 넣으시면 되는데요.. enzyme site가 넣고자 하는 vector와 반대로 있다면 당연히 뒤집혀서 들어가겠지요..^^;
답변 2  |  2008.06.02
Q. 클로닝 질문드려요~벡터 바꾸기
pCMV-SPORT6에 들어있는 클론을 샀는데 restriction enzyme으로 잘라서 클로닝을 하려고 하는데 안되고 있어요 혹시 이 벡터에 들어있는 클론을 어떻게 다른 벡터로 옮길 수 있는지 아시는 분 안계신가요?ㅠㅠ
A.  R/E 처리 후 ligation하는 방법이 일반적이죠.. 일반적인 방법으로 실험이 안되면 문제가 있네요.. insert를 PCR로 증폭해서 옮기는 방법도 있지만 잘라서 연결이 안된다면 실험 방법적으로 문제가 있으며 R ...
답변 2  |  2008.06.04
Q. 클로닝시 gene of interest 에 start/stop codon
따로 합성하여 제 cDNA앞뒤로 ligation해 주어야 하는 건가요? 클로닝을 해본적이 없어서....혹시 질문을 읽으시는 분들께서 힐책하실 수도 있을 거 같습니다... 부디...선배님들의 답변 부탁드립니다. ...
A.  답변 1. 일반적으로 모든 유전자에는 CDS라고 하여 Gene bank에 보시면 그 시작과 끝의 위치가 나옵니다 다시 잘 보세요 (ex CDS 314... 1099) 예를들어 A gene의 mRNA크기가 1500bp이고 CDS가 위와 같을경우 1500bp중 ...
답변 6  |  2008.06.12
Q. 클로닝 후 인서트가 작아졌어요
120pb 확인했고 이 PCR product를 TOPO이용해서 클로닝 했는데요. 클로닝후 시퀀싱을 해서 인서트를 확인했는데 사이즈가 확줄었어요 약 60 bp로... 이상한건 forward와 reverse primer 시퀀스는 확인되는데 그사이에 ...
A.  하나. 인서트가 70bp가 남아 있다고 했는데 클로닝시에 썼던 forward와 reverse primer랑 매치되는 시퀀스가 확인되고 그 사이에 8bp만 남아 있다면 프라이머 크기가 각각 31mer라는 얘기입니까? 그럼 8bp는 ...
답변 4  |  2008.12.10
Q. 클로닝하는데 정말 이상한 일이 발생했습니다...;;;
아니면 저것을 계속사용해도 되는건지, 아니면 저 클로닝이 혹시나 제대로 된 것인지 확인할 방법이 있는건지,,,, 갈팡질팡 아무것도 몰라서 질문을 올립니다...ㅜㅜ 참고로, Parkin DNA 내부에 EcoR5 site는 ...
A.  다시...;;;;;라는 말밖엔.... 나중에 실험을 계속 진행하다가 막히면. 먼가 찜찜해서 다시 하게 됩니다 지금부터 다시 하시는 것이..
답변 3  |  2010.05.23
Q. 클로닝할 때 E.coli 균주에 관한 질문???
cut했을 때와 같은 band가 나타났습니다.. 그런데 문제는 클로닝이 완료됐다 싶은 이 2개의 sample은 DNA농도가 약 0.03ug/ul로 너무 낮아서, 냉장 보관해둔 cell에 LA media만 넣어서 새로 키웠습니다. (다시 ...
A.  제대로 된 클론을 확보했는데 다시 키웠더니 이상하다는거죠? 오염된것이라 생각하시는것 같군요. LA plate에 streaking해서 single colony를 얻어서 다시 miniprep 해 보시지요. 아니면 이미 확인된 클론 plasmid ...
답변 2  |  2010.08.10
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PTC-0225 | 한국표준과학연구원 | 2000.03.07
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