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정확도순 ㅣ 날짜순
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| Q. 젤을 쿠마시블루로 염색 할시에...생긴 문제점.. |
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트랜스퍼를 안하고..
우선 로딩만해서
그 젤을 가지고 쿠마시블루로 염색을 했는데요..
문제는 마커는 염색이 잘되서 씻으면 잘 됐지만..
프로테인을 걸었던 레인들에서는 이상하게 다들 ... |
| A. 단백질이 없는 경우일 겁니다. pH나 기타 gel에 문제가 있다면 marker도 전개가 되질 않습니다. 하지만 marker가 정상적으로 나왔고 sample에 아무 band도 없다면 이는 단백질 prep과정에서 문제가 있었던 것입니다. |
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답변 1 | 2009.06.26 |
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| Q. HA원료 쿠마시블루함량시험관해 |
| 원래는 약전에따라 시험하다가 쿠마시로해보는데 검량선이 영 개판이네요;;
어떤실수가 있을까요
쿠마시; 100mg + 50ml 95%etOH ☞ 100ml 85% phosphoric acid ☞ 멸균증류수로800 맞춤 ☞필터(pes)
스탠다드 500mg/ml ... |
| A. CBB로 HA 정량이 안될겁니다.
CBB는 단백질에서 basic amino acid에 결합해서 정량가능합니다. |
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답변 4 | 2019.04.24 |
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| Q. 쿠마시 블루 destaing 시간, zymography destaing 시간도,, |
| 쿠마시 블루 염색하고
destaing 시간을 비교적 2일까지도 길게 잡는데요
몇일까지 destaing해도 될까요??
zymography 도 destaing 하는데
얼마나 많은 시간 동안 해도 될까요??, |
| A. SDS-PAGE 에 protein 전기영동 한 뒤 staining 하는 과정 중 destain 말씀하시는거죠?
destaining time 은 실험에 따라 / 실험자에 따라 다르긴 하겠지만,
일반적으로 1시간 정도면 적당하지 않나요? (Protein methods, 1996) ... |
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답변 1 | 2011.10.11 |
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| Q. gelatin zymography band |
| MMP가 없는 부분부다 gelatin이 조금만 남아있으니까 쿠마시블루로 염색했을 때 gelatin 양이 적어서 염색이 덜되어 band가 나타나는건가요?
너무 기초적인 질문이지만 실험을 직접해보기전에 궁금해서 ... |
| A. peptide들이 생성되기는 하는데 염색이 잘 안될 정도로 random hydrolysis가 됩니다.
상당히 저분자로 전환되기 때문에 SDS-gel에서 확산되어 빠져나갑니다.
따라서 활성이 있는 부위는 염색될 기질이 없다고 ... |
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답변 3 | 2018.11.10 |
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| Q. gelatin zymography 관련 질문 |
| 원래는 coomassie blue에 의해서도 염색이 되지만
protocol상 쿠마시블루 staining 전에 증류수로 겔을 씻어내려 그때 효소도 같이 씻어내리기
때문에 mmp는 염색이 안되고 결국 white band로 뜨는것이 맞나요 ... |
| A. protocol상 쿠마시블루 staining 전에 증류수로 겔을 씻어내려 그때 효소도 같이 씻어내리기
때문에 mmp는 염색이 안되고 결국 white band로 뜨는것이 맞나요?
: 아뇨.. 증류수로 gel을 washing 해도 단백질이 ... |
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답변 3 | 2018.11.08 |
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| Q. Transfer에서 자꾸 문제가 생깁니다. 도와주세요 |
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트렌스퍼 되었다고 보기에는 너무 뚜렷하고 진하게 쿠마시블루 염색이 되었습니다.
그래서 조건을 수정하고
2장- 140mA, 1시간 20분 진행
이 membrane 중간 부분에도 하얗게 남는 부분이 발생하였지만 ... |
| A. 1.트랜스퍼 문제로 생각됩니다.
2. 저는 퐁슈염색이 골고루 나오지 않을경우 트랜스퍼 문제라고 생각합니다.
3.
(1)저희 연구실 semi dry 조건
20V 100mA 30분 /1장당
20V 100mA 1시간 / 2장.
semidry 기기 크기? 넓 ... |
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답변 2 | 2018.03.21 |
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| Q. [웨스턴] transfer 한 젤이요~~ |
| 쿠마시블루 시약으로 염색을 했는데요.
트랜스퍼가 된 젤도 밴드가 나오나요?
아님 밴드가 나오면 트랜스퍼가 안된건가요? |
| A. 트랜스퍼가 잘되어도 남은 젤을 쿠마지로 염색해보면 밴드가 나오더라구요^^
조금씩은 다 나오는거 같아요. |
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답변 1 | 2008.02.25 |
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| Q. SDS-PAGE에 관해 질문합니다. |
| 쿠마시블루로 염색해서 밴드를 확인하고 바로 gel elution 하려고 하는데요
destaining solution으로 염색을 완전히 뺀 상태에서 gel dlution해야하는지 궁금합니다.
그리고 저분자량 분리할때 Tricine gel쓰는게 ... |
| A. Mass분석을 위한 gel elution이라면 완전히 빠지지 않아도 괜찮습니다.
근데, 염색이 완전히 빠지면 elution하기 힘들지 않나요?? |
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답변 1 | 2009.05.30 |
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| Q. Western 시 transfer 관련 질문드려요 |
| PVDF membrane을 사용하여 transfer를 시켰는데 끝난 후 gel을 쿠마시블루로 염색하니 단백질이 염색되어 나왔습니다
그래서 transfer 조건을 달리하여 전압과 시간을 늘려보아도(90V, 3시간) 여전히 gel에 ... |
| A. membrane이 충분히 activating 안된거 아닌가요???? |
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답변 3 | 2012.12.03 |
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| Q. western blot 확인 |
| transfer 하고 단백질이 잘 붙었는지 확인하기 위해 폰슈? 라는것 많이들 사용하시는거서 같던데 ... 확인할수 있는 방법이있나요?
SDS page gel 염색할때 사용하는 쿠마시블루 이걸로 염색시켜도 되나요 ... |
| A. 폰슈를 사용하면 염색하여 확인 후 웨스턴이 진행 가능합니다
다른 거로는
아미드블랙이라는 염료로 염색하면 확인할 수 있으나
웨스턴을 진행 할 수 없습니다 |
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답변 2 | 2016.11.14 |
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