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실험Q&A    30건 정확도순 날짜순
Q. 젤을 쿠마시블루로 염색 할시에...생긴 문제점..
.. 트랜스퍼를 안하고.. 우선 로딩만해서 그 젤을 가지고 쿠마시블루로 염색을 했는데요.. 문제는 마커는 염색이 잘되서 씻으면 잘 됐지만.. 프로테인을 걸었던 레인들에서는 이상하게 다들 ...
A.  단백질이 없는 경우일 겁니다. pH나 기타 gel에 문제가 있다면 marker도 전개가 되질 않습니다. 하지만 marker가 정상적으로 나왔고 sample에 아무 band도 없다면 이는 단백질 prep과정에서 문제가 있었던 것입니다.
답변 1  |  2009.06.26
Q. HA원료 쿠마시블루함량시험관해
원래는 약전에따라 시험하다가 쿠마시로해보는데 검량선이 영 개판이네요;; 어떤실수가 있을까요 쿠마시; 100mg + 50ml 95%etOH ☞ 100ml 85% phosphoric acid ☞ 멸균증류수로800 맞춤 ☞필터(pes) 스탠다드 500mg/ml ...
A.  CBB로 HA 정량이 안될겁니다. CBB는 단백질에서 basic amino acid에 결합해서 정량가능합니다.
답변 4  |  2019.04.24
Q. 쿠마시 블루 destaing 시간, zymography destaing 시간도,,
쿠마시 블루 염색하고 destaing 시간을 비교적 2일까지도 길게 잡는데요 몇일까지 destaing해도 될까요?? zymography 도 destaing 하는데 얼마나 많은 시간 동안 해도 될까요??,
A.  SDS-PAGE 에 protein 전기영동 한 뒤 staining 하는 과정 중 destain 말씀하시는거죠? destaining time 은 실험에 따라 / 실험자에 따라 다르긴 하겠지만, 일반적으로 1시간 정도면 적당하지 않나요? (Protein methods, 1996) ...
답변 1  |  2011.10.11
Q. gelatin zymography band
MMP가 없는 부분부다 gelatin이 조금만 남아있으니까 쿠마시블루로 염색했을 때 gelatin 양이 적어서 염색이 덜되어 band가 나타나는건가요? 너무 기초적인 질문이지만 실험을 직접해보기전에 궁금해서 ...
A.  peptide들이 생성되기는 하는데 염색이 잘 안될 정도로 random hydrolysis가 됩니다. 상당히 저분자로 전환되기 때문에 SDS-gel에서 확산되어 빠져나갑니다. 따라서 활성이 있는 부위는 염색될 기질이 없다고 ...
답변 3  |  2018.11.10
Q. gelatin zymography 관련 질문
원래는 coomassie blue에 의해서도 염색이 되지만 protocol상 쿠마시블루 staining 전에 증류수로 겔을 씻어내려 그때 효소도 같이 씻어내리기 때문에 mmp는 염색이 안되고 결국 white band로 뜨는것이 맞나요 ...
A.   protocol상 쿠마시블루 staining 전에 증류수로 겔을 씻어내려 그때 효소도 같이 씻어내리기 때문에 mmp는 염색이 안되고 결국 white band로 뜨는것이 맞나요? : 아뇨.. 증류수로 gel을 washing 해도 단백질이 ...
답변 3  |  2018.11.08
Q. Solube insolube 확인  |  첨부파일 첨부파일
밑에 pellet을 다시 Lysis buffer넣고 resuspend시킨 sample)입니다. 쿠마시블루로 확인이 힘들어 두번째와 세번째사진은 W.B으로 찍은사진입니다. A,B부분을 보면 2개 line모두 항체에 찍혀나오는데 이런경우는 ...
A.  예 큰 영향을 미칠 수도 있습니다. 보통 sonication 시에는 PBS로 충분하지만, scale에 따라 lysozyme등등이 필요하기도 합니다. 하지만 small sacle의 경우, PBS로 lysis후 다운시켜 sup은 그대로 SDS smaple buffer 넣어 ...
답변 11  |  2020.06.03
Q. Transfer에서 자꾸 문제가 생깁니다. 도와주세요
트렌스퍼 되었다고 보기에는 너무 뚜렷하고 진하게 쿠마시블루 염색이 되었습니다. 그래서 조건을 수정하고 2장- 140mA, 1시간 20분 진행 이 membrane 중간 부분에도 하얗게 남는 부분이 발생하였지만 ...
A.  1.트랜스퍼 문제로 생각됩니다. 2. 저는 퐁슈염색이 골고루 나오지 않을경우 트랜스퍼 문제라고 생각합니다. 3. (1)저희 연구실 semi dry 조건 20V 100mA 30분 /1장당 20V 100mA 1시간 / 2장. semidry 기기 크기? 넓 ...
답변 2  |  2018.03.21
Q. [웨스턴] transfer 한 젤이요~~
쿠마시블루 시약으로 염색을 했는데요. 트랜스퍼가 된 젤도 밴드가 나오나요? 아님 밴드가 나오면 트랜스퍼가 안된건가요?
A.  트랜스퍼가 잘되어도 남은 젤을 쿠마지로 염색해보면 밴드가 나오더라구요^^ 조금씩은 다 나오는거 같아요.
답변 1  |  2008.02.25
Q. SDS-PAGE에 관해 질문합니다.
쿠마시블루로 염색해서 밴드를 확인하고 바로 gel elution 하려고 하는데요 destaining solution으로 염색을 완전히 뺀 상태에서 gel dlution해야하는지 궁금합니다. 그리고 저분자량 분리할때 Tricine gel쓰는게 ...
A.  Mass분석을 위한 gel elution이라면 완전히 빠지지 않아도 괜찮습니다. 근데, 염색이 완전히 빠지면 elution하기 힘들지 않나요??
답변 1  |  2009.05.30
Q. Western 시 transfer 관련 질문드려요
PVDF membrane을 사용하여 transfer를 시켰는데 끝난 후 gel을 쿠마시블루로 염색하니 단백질이 염색되어 나왔습니다 그래서 transfer 조건을 달리하여 전압과 시간을 늘려보아도(90V, 3시간) 여전히 gel에 ...
A.  membrane이 충분히 activating 안된거 아닌가요????
답변 3  |  2012.12.03
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