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실험Q&A    151건 정확도순 날짜순
Q. competent cell 만드는 미생물 중에 항생제 저항성을 갖는 미생물이 어떤것이 있나요?
컴셀을 만드는 미생물중에 항생제 저항성 유전자가 없는줄 알았는데 어떤 책을 보니까 있는거 같더라구요. 저항성을 갖는 미생물의 종류좀 알려주세요~~~
A.  짧은 지식이지만 보통 항생제 관련하여 transformation 하시는 거라면 plasmid 하시는거 아닌가요? 그렇다면 plasmid가 자체적으로 항생제 내성을 가지고 있는데 competent cell같은 경우에 항생제 내성을 가지고 ...
답변 1  |  2006.08.31
Q. stbl3 competent cell 써 보신분~~~
com cell이 안만들어지네요..ㅠㅠ invitrogen에서 구입한건데 혹시 컴셀 만들어 보신분 있나요?? 어케 만드는지 갈쳐주세염~~ㅠㅠ 아주 이것때문에 미치것습니다. (연구비 압박~~ ...
A.  죄송하지만 저도 이번에 stbl3 com cell을 구할려고 하는데 혹시 어디에 계시는지 메일 부탁드려도 될까요? sobless@naver.com
답변 1  |  2008.04.08
Q. 대장균 컴셀 DH5a 말고 보통 뭐쓰시나요?
컴셀루요 DH5a 자주 썼었는데요 오염된건 아닌데요 키워보면 잘 크구요 플레이트 발라봐도 이상한 균은 안보입니다 근 ... 더 T/F 더 잘되는 host 어떤거 있나요? 혹시 XL1 - blue MRF 도 컴셀로 쓰나요 ...
A.  Competent cell을 잘못만드신 듯 합니다. cell이 오래되었거나 또는 보관이 불량하더라도 효율차이가 급격하게 나지는 않습니다. XL1-blue 로 competent cell을 만들면 같은 방법이라도 DH5a에 비해 5-10배정도 효율 ...
답변 3  |  2010.05.05
Q. DH5alpha 컴셀이 이상해요
Subcloning Efficiency™ DH5Alpha™ Competent Cells (invitrogen) 새것 꺼내서 50ul에 ligation mix 5ul 넣고 protocol대로 ice 30min heat shock 42도 20sec ice 2min +YENB 750ul 넣고 37도에서 1시간 shaking해서 키우고 배지에 뿌리려고 ...
A.  들어 fimbriae, flagella등 들의 conpostion이 변하기 때문인데요, 컴셀의 경우는 워낙에 애들이 정상이 아닌 상태이기 때문에 갑작스런 salt농도의 증가가 치명적일수 있습니다 ...
답변 3  |  2008.06.14
Q. 대장균 컴셀 보관시..질문
CaCl2 로 만든 heat shock용 대장균 컴셀을 -70도에 보관할때 glycerol을 넣어서 보관해야 하나요? molecular cloning 책(3판)에 보니 그냥 aliquot해서 -70도에 보관하라 되있는데요 글리세롤 넣어야 되지 않나요?
A.  컴셀은 aliquot 해서 transformation 할 때 쓰려고 -70도에 넣는거아닌가요? 글리세롤 넣지 않는것이 맞는거지요 ... cell을 stock 할 떄에나 글리세롤넣고 차후에 풀어서 배양한다음에 다시 컴셀을 만드는게 ...
답변 2  |  2011.01.25
Q. RBC HIT 컴셀 쓰시는 분 계신가요
HIT DH5 alpha 컴셀(논힛샥 셀)을 가지고 크기가 약 41만base 정도 되는 plasmid를 transformation하려 했으나 transformant가 아예 뜨지 않더군요. 그런데 다른 회사 DH5 alpha로 실험한 것에서는 그렇게 큰 사이즈의 ...
A.  410,000bp라 하시는건가요?? 저희는 3~7000bp 정도 쓰는데 RBC 제품 같은거 쓰는데 무난히 잘 나옵니다. 간혹 ... 농도를 낮춰야 겨우 나오는것들도 있습니다. 저희의 경우는 컴셀보다는 plasmid의 문제가 더 ...
답변 4  |  2016.04.27
Q. 컴셀 제품으로 스탁 만들어도 되나요?(com cell)
스탁으로 만들어도 큰 상관이 있을까요? 2. Heat shock용 컴셀은 세포벽에 염화클로라이드가 들어있어있는데 계대배양시 균이 회복되어 순수한 DH5a가 될까요 ...
A.  1. 보통 컴셀을 사면 그 중 하나 정도는 그냥 LB에서 배양해서 컴셀을 만들어 사용합니다. 2. CaCl2는 세균 배양에 ... DH5a 가 그냥 DH5a지 DH5000a가 되지는 않습니다. 안심하고 배양해서 컴셀로 만드세요 ...
답변 1  |  2016.05.25
Q. dam-컴셀에 클로닝실험을 진행해도 될까요?
a효율을 확인하니 댐마이너스 셀이 더 좋더라구요 두가지 컴셀 다 실험실에서 직접 만들어쓰고 dh5a는 만든지 약 3주 dam-는 약 2주쯤 되었습니다 그런데 dam-에서 키운 e coli의 plasmid로 게이트웨이클로닝 ...
A.  중요한 것은 cloning에 필요한 최저 효율입니다. 최저 10^7은 되어야 합니다. DH5a dam- 균주는 만드신 건가요? dam- 균주는 구하기 쉽지 않은데? DNA들을 methylation이 없는 PCR 방법으로 준비한 것이라면 dam- 균 ...
답변 1  |  2014.10.15
Q. RBC BL21(DE3)컴셀 쓰는데 transformation이 갑자기 안되요..ㅠㅠ
BL21(DE3)컴셀을 쓰고 있는데, 잘되던 컴셀이 pET42b벡터에 클로닝한게 들어가질 않습니다..ㅠㅠ kan plate로 도말 하는거라 25짜리로 항셍제 만들어서 쓰고있구요... 50으로 해서 안떠서 25로 낮추었는데도 ...
A.  제가 해본결과 10kb는 충분히 들어 갑니다 효율은 좀 떨어지겠지만요.. 혹 벡터가 잘못 되지는 않았는지 확인해보시는게 좋지 않을까요?
답변 3  |  2012.11.15
Q. XL1-blue 컴셀을 SOB media에...
컴셀 만들려고 배지에 키우는 중인데요. DH5a는 L/B 배지에서 37도에서 O.D 값이 0.5 정도로 키울때 3시간 정도 걸렸어요. XL1-blue는 SOB배지에서 이노우에 법으로 만들때는 저온 16도 정도에서 오랬동안 ...
A.  좀더 키워보세요.
답변 1  |  2008.01.18
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