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실험Q&A    125건 정확도순 날짜순
Q. PCR product를 제한효소 처리 후 나오는 밴드 사이즈가 항상 크게 나와 질문 드립니다.
안녕하세요! 현재 PCR products를 restriction enzyme처리 후 밴드 패턴을 확인하고 있는 학생입니다. PCR product의 기본 사이즈는 600bp정도인데, 제한효소를 처리하고 나면 밴드 사이즈가 300bp 정도 더 크게 나옵 ...
A.  PCR product자체가 target size가 아닌 900~1000bp가 나온다면 원하는 product가 아니므로 다시 PCR하는게 좋습니다. 혹시 PCR product 전기영동 시 band가 900~1000bp 하나만 나오나요? 그렇다면 PCR product에 대한 정보가 ...
답변 4  |  2019.02.22
Q. restriction enzyme 사용하기전 cutter
저는 duet vector에 restriction enzyme사용하여 클로닝을 하고있는데, 우선 MCS1부분에 클로닝 완료된 plasmid를 제한효소로 자른후 MCS2에 클로닝 완료하려고 하고 있어요. MCS2부분에 들어가는 gene에서는 NdeI, XhoI ...
A.  다른 제한효소를 사용하는 게 건강에 이롭습니다. NdeI은 compatible end를 만드는 제한효소들 중에 통상적인게 없어요.
답변 2  |  2017.01.24
Q. 제한효소 / restriction enzyme digestion / enzyme cutting 에 대한 질문입니다.
제가 pGEX.KG 라는 plasmid에 EcoRI 과 XhoI 을 이용하여 자른 후 insert를 집어넣으려고 합니다. DH5alpha 라는 competent cell을 사용해서 transformation을 하였는데요. 잘린 pGEX.KG plasmid만 넣고 transformation을 했을 때 엄 ...
A.  Eco Xho는 Exo buffer로 동시에 자르면 됩니다. 사용한 vector의 양이 어찌 되는지요. 너무 많은 양의 DNA를 자르게되면 안잘리고 남은것들이 많고 이것들이 transformation 시에 콜로니를 형성하는 주요 원인입니 ...
답변 4  |  2014.10.09
Q. hind3 ,pst1 제한효소 절단 (restriction enzyme cut)  |  첨부파일 첨부파일
3번째.4번쨰 각각 Hind3, pst1 제한효소를 이용해 linear lamda DNA를 절단한 결과 입니다. 1,2 번쨰는 size marker입니다. 각 제한효소로 절단한 dna의 전기영동 결과 밴드의 개수와 밴드가 무엇을 의미하는지 알 ...
A.  hind3 마커입니다. 7군데의 frgment 가 나온다고 하셨는대 위에 사진에선 8군데 인데 1개는 뭔가요?
답변 3  |  2018.09.30
Q. restriction enzyme 후 dna가 사라지거나 무작위 cut이 되요ㅠㅠ. 도와주세요!  |  첨부파일 첨부파일
insert의 Foward는 Ned1과 Reverse는 Hpa1, Sma1으로 design 했습니다! 안정성을 위해 t-vector에 넣었고, 그 후로 cloning 진행했습니다! vector는 bamh1으로 cut , insert는 sma1으로 cut 한 후 klenow를 이용해 vector, insert 둘다 ...
A.  일단 가장 아래 나오는 크고 강한 band는 RNA 같네요. plasmid DNA를 사용하신 거라면 RNase 처리를 잘 하시길 바랍니다. BamHI은 조건이 안 맞으면 star activity가 나타납니다. buffer 조성에 BSA 포함되어 있는지 ...
답변 2  |  2018.01.08
Q. restriction enzyme(제한효소)을 두가지 쓸 때와 한가지 쓸 때의 차이를 설명해주세요
DNA cloning을 할 때, vector와 target DNA에 제한효소를 한 가지 사용할 때와 두 가지 사용할 때 효율 측면에서 차이점이 있나요?
A.  Double digestion을 하게 되면, 높은 효율, 방향성 - 2가지가 좋습니다.
답변 1  |  2019.09.21
Q. restriction enzyme cut 질문!
restriction enzyme cut 실험을 하게 되었는데요 실험 과정이 Materials: 절단하고자하는 DNA 10ul, 10x 반응완충용액 2ul, 제한효소 1ul씩, 증류수 2ul - Method: 1) DNA와 buffer, dH2O를 먼저 섞고 마지막에 제한효소를 넣 ...
A.  볼텍싱을 살짝 1초 정도 해도 되고 손가락 끝으로 튜브를 튕겨줘도 됩니다. 반응액은 모두 해봐야 10-20ul 일텐데 왠만해선 기포가 생기지도 않습니다.
답변 1  |  2016.04.19
Q. restriction enzyme이 single strand DNA도 자를 수 있나요?
restriction enzyme digestion 실험을 하려고 하는데, template가 single strand입니다.. 찾아봐도 자를 수 있는 효소가 있다고 하지, 어떤 효소가 자를 수 있는지는 나와있지도 않고요... +제한효소가 세포 안으로 ...
답변 0  |  2017.02.02
Q. Restriction enzyme 처리 후 잘린 DNA의 intensity가 약해요
제가 몇달째 cloning 실험 중인데요 결과가 신통치 않습니다. 도와주세요. 일단 제 상태는 TA vector에 저의 insert DNA(700bp)를 subcloning 한 상태이구요, 이것을 restriction enzyme Afl2 와 PacI 으로 잘라서 제가 원하 ...
A.  아가로스 젤에서 DNA 밴드의 intensity는 DNA의 크기에 비례합니다. 제한효소로 자른 후 젤에 걸었을때 TA 벡터보다 insert의 크기가 1/2 바께 안된다면 intensity도 대략 1/2 이어야 정상입니다. 자른 후에 smear ...
답변 1  |  2014.10.17
Q. PCR후 제한효소처리가 잘 안되요. 제한효소값 계산하는것 좀 도와주세요.
안녕하세요~~ 실험실 초보 인사드려요~!! 다름이 아니오라 PCR후 제한효소 처리가 잘 안되요. PCR후 product 의 농도는 다들 400ng/㎕정도에 전기영동으로 예쁜 밴드(220bp)를 확인하였어요. 문제는 여기서부 ...
A.  제한효소를 16시간 처리하는 경우는 아주 대량의 DNA를 잘라둘때라면 그렇게 할 수는 있지만 보통 그렇게는 안합니다. Star activity도 있고 DNA의 말단부위가 영향을 받을수도 있기 때문이죠. 제한효소 ...
답변 4  |  2007.11.23
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