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실험Q&A    2,463건 정확도순 날짜순
Q. mammalian cell에서 단백질 정제
있으신 분이나, 저와 같이 target protein과 antibody를 이용한 정제를 해 보신 분이 있으시다면 꼭 ~~~~~^^ 조언 부탁 드립니다. 학위 과정중에 너무나 중요한 실험이기에 자꾸 맘이 조급해지네요. 그럼 많은 ...
A.  his-tag을 쓰셨다면 니켈 컬럼을 쓰시면 되구요.. 그렇지 않다면 antibody를 이용한 컬럼을 쓰셔야 겠지요... protein-G agarose bead는 IP를 해서 하는거 같은데..
답변 2  |  2006.06.15
Q. immuno-affinity column을 이용한 단백질 정제에 대해서..(급질)
대한 antibody를 이용한 immuno-affinity column을 제작하여 분리, 정제할려고 합니다. 먼저 이 column을 제작해야하는데 어떤 resin을 써야하는지, 어떻게 column을 packing 해야 하는지 전혀 아는바가 없습니다. 먼저 ...
A.  You can find kit from pierce. "Seize X Immunoprecipitation Kits" http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?type=ProductFamily&ID=01010345
답변 1  |  2006.06.16
Q. Ni-NTA 정제가 갑자기 안됩니다.
화학공학 전공자라 이 분야에 대해 좀 어렵기도 합니다. 정제가 안 되는 원인이 무엇인지 정말 궁금하네요.. ...
A.  단백질은 plasmid를 새 컴셀로 transformation하고 뜬 colony를 키워서 뽑는게 가장 잘 나옵니다. miniprep을 자주 할 필요는 없고, 그냥 좋은 컴셀만 쓰면 됩니다.
답변 4  |  2014.03.24
Q. 단백질 정제 컬럼 문의 드립니다.
단백질 정제를 하려고 컬럼을 구입하였습니다. 이제, 이 컬럼에 IDA resine을 충진을 시켰는데요. 이 충진된 레진을 LC로 사용하려고 하는데. 프로그램을 어떻게 짜야할지 고민이 되서 고수님들께 ...
답변 0  |  2014.05.29
Q. 단백질 정제시,컬럼레진 문의드려요
단백질 정제를 하려고 컬럼을 구입하였습니다. 이제, 이 컬럼에 IDA resine을 충진을 시켰는데요. 이 충진된 레진을 LC로 사용하려고 하는데. 프로그램을 어떻게 짜야할지 고민이 되서 고수님들께 ...
A.  IDA resine이 His-tag affinity chromatography에 사용하는 거 아닌가요? 그리고 ICV는 column의 internal volume을 말씀하시는 거구요? 제가 이해한 것이 맞다면... Internal volume을 계산하시고자한다면 blue dextran같이 고분 ...
답변 1  |  2014.06.05
Q. 단백질 정제시 문제
8M에서 약하게 밴드가 보여 두가지의 샘플에 GST레진을 붙여 정제를 하였으나 코마시 결과 레진에 제가 원하는 프로테인이 바인딩이 안한걸로 보였습니다. 첫번째 워싱에서 다빠졌더군요. 여기저기 ...
A.  저도 한때 GST가 solubility를 높여줄 것이라는 착각에서 몇개월을 날린 적이 있습니다. deletion mutant를 만 ... (가령 pET42a) vector를 이용해 his resin으로 denaturation 조건에서 정제하는 것을 추천해 드립니다 ...
답변 5  |  2009.03.24
Q. 정제 다음 단계로는?  |  첨부파일 첨부파일
밑에 있는 밴드가 단일밴드라고 말을 할수 있나요? 꼭 정제를 하고 싶습니다. 다음으로 제가 해야 할일들이 무엇인지 ? 좋은 조언 부탁드리겠습니다 ...
A.  두 단백질간의 size차이가 상당히 큰 것으로 보이기 때문에 gel filtration을 한번 더 해주세요. 그리고 아랫밴드는 얼핏보기에 "two band"로 보입니다.
답변 2  |  2007.05.25
Q. 단백질 정제후 dialysis 과정
시켜준후, affinity chrimatograpy를 사용하여 정제하였습니다. 정제를 하는 과정에서 urea 를 제거해주고, 결국 soluble 한 단백질만 얻어냈습니다. Dialysis를 통해서 salt 를 제거해주었습니다. 그리고 SDS-PAGE로 ...
A.  단백질 정제 각 단계마다 aliquot해서 PAGE로 확인하시면 어느 단계에서 손실이 발생했는지 알 것 같네요. 질문에서처럼 Dialysis과정에서 손실이 있을 것으로 생각되신다면, chromatography에서 얻은 eluate를 ...
답변 2  |  2009.04.22
Q. 단백질 정제 고수님~!!
같은데 GST pushion에 의해서도 99%이상의 순도로 단백질 정제가 가능한가요?? 간단반 방법이라던가 아니면 논문 혹은 제가 찾아볼수 있는 키워드라도 알려주시면 감사하겠습니다 ...
A.  제거 -- 단백질의 PI를 안다면 pH ppt 방법도 괜찮습니다. 5. 정제 - tag을 하셔도 순도를 더 향상시키기 위해서는 다른 추가적인 방법들이 필요할겁니다. anion, cation, HIC, Heparin resin 등등 여러 방법이 있으니 ...
답변 2  |  2010.03.22
Q. BL21 에서 단백질을 발현시켜 정제할때 궁금점..
궁금한게 있어서요.. 어떤분의 말을 들으니 단백질 정제시 조건(서스펜션시 사용되는 버퍼의 조성 등) 이 그때그때 다르기 때문에 조건을 잘 잡아야 한다고 하는데..제가 발현하려는 단백질과 완전히 ...
A.  네 버퍼에 따라서 단백질 상태가 달라집니다. detergent의 함유여부, pH, 온도 등에 민감한게 protein이잖아요. 기존 사례를 찾기힘들면 먼저 가장 많이 사용하는 조건으로 해본 뒤에 조절하시는 수밖에 없 ...
답변 2  |  2009.06.29
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