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실험Q&A    77건 정확도순 날짜순
Q. western을 했는데 band가..
했는데 band가.. 안녕하세요 참이상한일이죠 제가 원하는 band뿐만아니라 다른band들이 많이 나옴니다..그것도 아주~ 선명하게 근데요 Ab문제는 아닌거 같아요 왜냐면요 제가 썼던 Ab를 다른사람이 ...
A.  님이 원하는 band 의 위치보다 위쪽에 있나요...? 아니면, 아랫쪽에 있나요...? 웨스턴 과정에 전혀 문제가 없다면... 위쪽 band 는 dimer 혹은 polymer 일 수 있습니다... DTT 혹은 b-MeOH 의 양을 늘리시거나 좀더 ...
답변 4  |  2002.05.19
Q. western blot시 main band 외 band에 관한 질문
western blot 하였을 경우, antibody들 보면 정해진 사이즈가 있는데 그 사이즈 외에 나오는 band들은 무엇을 의미하는건지?? 제가 보고자 하는 protein 사이즈에는 경향이 나오지 않았는데 다른 사이즈에 원하 ...
A.  보통 non-specific band는 그 lane에 antibody가 붙는 단백질이 있을 때 생깁니다. 그 lane에 antibody가 붙는 단백질이 없으면 non-specific band가 많이 생기지 않죠.. 한가지 팁을 드리자면 marker 보는것이 문제가 되는 ...
답변 4  |  2013.04.17
Q. 웨스턴고수님들!! ) 모든 샘플에서 동일한 밴드가 떠요!! help
웨스턴시 모든 샘플에서 35kDa 쯤 동일한 밴드가 뜹니다. 다른 밴드(타겟) 도 잘 나옵니다. 혹시 항체문제인가 싶어서, 다른 샘플도 전체 멤브레인 걸어보니 다른 항체로요. 역시 35쯤에서 진한 밴드가 ...
A.  construct라고 말씀하셨으니, 아마 tagging을 시킨 후 tagging antibody로 아서 확인하시는것 같은데,, 혹 flag를 사용하시 ... band로 진한 band가 뜹니다. 한번쯤 primary antibody의 titer를 확 낮춰서 아보세요 ...
답변 1  |  2009.03.07
Q. antibody purification..
문제가 있어서 band 들이 나타나는 것일까요? 그리고 band가 있는 elution sample들을 다시 column에 걸어서 내릴수는 없나요? serum이 얼마 되지 않고 귀한거라서요. 좋은 답변 부탁드립니다.. ...
A.  정제할때, serum의 filtration과 밴드는 크게 상관이 없습니다 (원심분리만으로도 충분합니다). wash를 충분히 잘해 주시면 해결될 문제입니다. 또 달리 생각해 볼 수 있는 것이 proteinG는 native 상태에서 ...
답변 1  |  2008.07.17
Q. silver staining이 잘 안되요...ㅠ.ㅠ  |  첨부파일 첨부파일
staining을 하는 중인데요... 계속 줄이 보이는데요... 줄이 생기는 것을 보면 특정 레더 (양 많은 곳) 와 동일 선상에 젤 전체적으로 줄이 가 있습니다... 매번 젤을 걸어서 staining 할 때 마다 이런 ...
A.  실버 스태이닝은 그자디 어려운 염색법이 아닙니다. 조금만 신경 쓰시면 좋을 결과를 얻으실 수 있을 것 같네요. 일단, 샘플의 정제도가 너무 낮은 것 같네요. 그리고, 젤과 젤판 사이가 완전히 밀착되 ...
답변 5  |  2008.06.23
Q. pcr시 band가 너무 끌려요
8도에서 했을때 band가 너무 많이떠 60도로 바꿔 봤습니다. band는 없어졌는데 target band 의 amplify가 잘 일어나지 않은 것 같습니다. 너무 얇게 떠서요 그리고 위에 끌리는 현상이 보여 64도로 ...
A.  annealing을 30초정도로 짧게하고, extention을 3분정도 해보세요 cycle도 늘리고
답변 2  |  2011.08.31
Q. polyclonal antibody
없는 콩과 분리한 polyclonal antibody를 섞어서 원심분리하면 band와 binding하는 antibody는 제거가 가능하다고 알고 있는데 방법 아시는 분 좀 도와 주시면 고맙겠습니다.. ...
A.  ''antibodies'' 책에 보면 immunoprecipitation 방법이 아주 잘 나와있어요. 제 생각엔 antigen이 없는 콩과 polyclonal antibody를 cold room에서 4시간 이상 slowly rotation으로 incubation 시킨 후 centrifuge하면 될 것 같은데요. ...
답변 1  |  2001.07.11
Q. PCR
. band가 제위치에 뜨질 안습니다. band가 많구요...band가 없가 싶으면 Primer dimer band가 생기구요...프라이머를 6번째 새로 디자인하여서 조건을 바꿔서 해야 할것 같은데요... 실험은 급하구 어떻해야 ...
A.   PCR과 전기영동해서 두세시간이면 되기 때문에 제가 조건을 한번 아보겠습니다. 의향이 어떠신지요? 의향이 있으시면 primer와 gene에 대한 간략한 정보와 함께 보내주세요 ...
답변 2  |  2006.06.20
Q. multiplex PCR에 관한 질문
PCR을 하면 band가 많이 보입니다. 어떤 유전자의 경우 band의 signal이 더 진하게 나와서 당황스러운데요... Primer를 소개해준 lab에 정확한 protocol을 요청하여보니 invitrogen의 taq을 사용하고 있으며 ...
A.  Multiplex PCR을 설정할때 가장 고려의 대상이 Primer와 Taq입니다. Taq 에 따라서 그리고 설정한 condition에 따라서 다른 band가 생기는것은 당연한겁니다. Taq도 바꿔 보시고 조건들도 바꾸어 보시는것이 가장 ...
답변 3  |  2006.10.23
Q. Bax를 웨스턴 했는데..이상합니다..  |  첨부파일 첨부파일
듯 합니다. 따라서 Bax Ab를 사용했는데, Bcl-2 같은 것이 힐 수도 있는 것나요? (Bcl-2 Ab로 WB를 해봤는데, 잘 안나옴니다. ...
A.  4개의 sample이 각각 다른cell line인건가요? 저정도는 non-specific라고 봐야 할거 같긴한데,, 위쪽의 밴드의 양이 각각 다르네요 (다른 cell line이라고 하면,, non-specific binding이 각각 다를 수도 있겠지만요) 저 ...
답변 2  |  2009.11.05
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