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실험Q&A    4,832건 정확도순 날짜순
Q. 발현에 관한 질문
pCDNA3.1 vector는 mammalian Cell전용인데, e.coli에서도 발현을 해도 문제가 안되는건지...도와주세요...ㅡ,ㅜ 만약 한다면 무슨 단점이 생기는지요...ㅡㅜ
A.  pcDNA3.1은 CMV promoter를 가지고 있으며 이 promoter는 E.coli에서는 작동을 하지 않습니다. 따라서 pcDNA3.1로 E.coli에서 단백질을 발현하는 것은 불가능합니다.
답변 1  |  2008.06.23
Q. 발현과 Vector에 관한 고수님들께...
8a에 두가지 gene에 각각 ATG를 붙이고 Cloning한 vector를 발현하면 발현이 될런지요? ---atg 1번 유전자---stop codon-----ATG 2번 유전자---Stop codon 이런식으로요...
A.  일반적으로 발현이 되는것으로 알고 있습니다
답변 13  |  2008.06.30
Q. 클로닝까지는 성공했는데 발현이 안되네요 어떻게 해야 할까요??
시퀀싱도 했는데 내부에 종결코돈도 없구요 근데 발현을 할려고 IPTG를 넣으면 쎌이 죽는건지 아니면 자라지 못하는지 타겟 프로테인도 뜨지 않고 똑같이 3ul를 로딩해서 전기영동하면 인덕션 안한건 ...
A.  중 하나일 것 같습니다. IPTG를 과하게 넣으셨거나.. 발현되는 단백질이 세포에 아주 toxic하거나 제 생각에는 일단 IPTG 양을 대폭 줄여서 사용해 보시고 그래도 비슷한 양상을 보인다면 expression 시스템을 ...
답변 4  |  2008.07.23
Q. 발현이 되질 않을까요??? ㅜ.ㅜ
유전자 자체가 그렇게 toxic한거 같지는 않은데 도대체 왜 발현이 되질 않을까요?? 아 그리고 pMAL-C4X 벡터 같은 경우에는 K21TB1이라는 호스트가 궁합이 잘 맞는다는데 왜 그런 건가요?? ...
A.  BL21(DE3) pLysS를 사용하셔야 IPTG가 pLysS에 반응하여 pET 시리즈 발현 유도하는 것으로 압니다. 저희도 예전에 BL21(DE3)에다 넣어서 했을때 안되었거든요. pET관련 제품 인비XXX이나 노바X인걸로 기억하는데 ...
답변 4  |  2009.06.02
Q. 벡터내의 promoter에 따른 발현차이 (꼭 답변 부탁드립니다 ㅠ)
있는 vector로 다시 cloning을 해야 하는건가요? Bovine cell에선 발현이 잘되었었는데....mouse cell에서 하니까 안돼서 너무답답해서 글올립니다 답변 꼭 부탁드리겠습니다 ...
A.  CMV는 강력한 promoter입니다...transfection이 되었다면 expression이 되겠지요.. cell origin과는 상관없습니다.... 제 생각에는 transfection efficiency를 먼저 check해 보시는 것이 좋을거 같습니다.. GFP vector를 사용해서 ...
답변 1  |  2009.08.19
Q. 단백질 발현에 관련되어 질문드립니다.
2번째 것이 발현되는듯 한데... 요렇게 되어 있어도 발현에 아무런 상관이 없을까요? translation 과정에서..알아서 척척 stop /start codon을 인지하는 건지....;;; (분자 생물학을 덜 배운건지...통..아리까리하여 ...
A.  이런 겹침은 세균에서 많이 보입니다. 원래 유전자가 그렇게 생긴거라면 대장균에서의 발현을 걱정하실 필요는 없는듯합니다.
답변 2  |  2010.07.01
Q. 큰 사이즈 단백질 발현하는 방법 좀 알려주세요~ㅠ
안녕하세요. 저는 120kDa정도 단백질을 E.Coli에서 발현시킬려구 합니다. 근데 단백질 사이즈가 커서 그런지 저온발현을 하여도 단백질 발현이 잘 되지 않아요. 혹시 좋은 방법이 있으면 알려주세요~ㅠㅠ
A.  MBP...기타등등...)을 붙여보길 권합니다 그리고 37도에서 발현은 시도하여 보셨는지요 일단 inclusion body라도 확인해야 soluble form으로 조건을 수정해 나갈 수 있습니다 기본적으로 염기서열, 아미노산 ...
답변 2  |  2011.07.01
Q. 단백질 발현시킬때 어떤조건들이 있나요
.. 아니면 대장균 생장곡선 상에서 어떤 부위에서 단백질 발현이 가장 많이 되는지도요... 아니면 다른 참고문헌이나 site라도 가르쳐 주세요.. 이리저리 찾다가 답답해서 올립니다...ㅠ.ㅠ ...
A.  IPTG를 처리하면 cell의 growth가 현저히 줄어들게 됩니다. Cell의 건강상태, growth상태, 온도, IPTG 농도, induction time 등이 많은 영향을 미칩니다. 논문에 나와있는 얘기는 아니지만 단백질의 종류에 따라 ...
답변 1  |  2006.04.15
Q. 유전자 사이 linker sequence를 넣어 한번에 발현하고싶습니다.
B 유전자를 이어서 발현하고 싶습니다. 결과적으로 발현된 A,B 단백질이 linker에 의해 연결되어 있는거죠.. 벡터에 종결코돈 제외한 유전자를 엔자임사이트 앞뒤로 넣어주게 되면 이어서 붙게 되는지요? ...
A.  링커를 따로 넣어줘야 되는데 (3의 배수로 맞춰야 됩니다) 길이는 그냥 마음대로 해도 되는 거 같습니다. 구글에 flexible linker라고 치면 이것 저것 뜰거에요. 그리고 앞쪽 단백질의 종결코돈은 없애야겠죠.
답변 2  |  2014.06.02
Q. 단백질 전기영동결과 벡터와 인서트가 따로 나와요.
엉뚱한 size라는것;;;' 제 Insert size는 약 1kb 이구요 vector중 과발현 부분은 약 26 kDa 또는 46kDa 인데.. 그럼 약 60 KDa는 넘어 줘야 하는데...;;;;45쯤에서 계속 나옵니다... 프레임 문제인가 싶어서 일단 sequencing ...
A.  제일 마지막 쪽에..... 제 Insert size는 약 1kb 이구요 vector중 과발현 부분은 약 26 kDa 또는 46kDa 인데.. 그럼 약 60 ... ...;;; (통상 GST에 제대로 클론이 되어 들어가도..GST만 일부 발현 밴드는 보일텐데....;; ...
답변 4  |  2010.04.09
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