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실험Q&A    1,275건 정확도순 날짜순
Q. 웨스턴 샘플 로딩에 대한 질문입니다.
웨스턴 시 로딩을 위해서 샘플을 로딩버퍼와 섞어서 만들고 있는 와중에 계산이 헷갈려서요.. 단백질 30 ug ... 되는 건가요? 볼륨은 28 uL정도 되는데 여기에서 25 uL만 따서 로딩하면 되는게 맞는거죠 ...
A.  - 30/1.33=22.5 uL의 샘플과 5.6 uL의 5x sample buffer를 섞으면 되는 건가요? 볼륨은 28 uL정도 되는데.. : 질문에 있는 그대로 loading sample을 만들면 총 28ul가 30ug이라는 뜻입니다.
답변 6  |  2020.02.27
Q. 웨스턴 샘플 로딩 시 팁을 얻고 싶습니다.
단백질을 로딩해야 하는게 가장 중요한데 육안으로 봐도 로딩이 들쭉날쭉된 것이 보여서 조언을 통해 스킬을 얻고 싶습니다 ...
A.  1. 샘플 로딩은 다양한 방법으로 해결이 가능합니다. ->편법이긴 하지만, 현재 상태로 가능한 방법은 70-80% 로딩 후 높은 전 ... 샘플과 동일량으로 로딩한다. 3) 샘플도 당연히 동일량으로 로딩한다 ...
답변 7  |  2020.02.27
Q. SDS gel 로딩  |  첨부파일 첨부파일
같은 날 다른 사람이 실험을 진행했는데 다른 사람은 잘 로딩되었습니다. 그래서 공용으로 사용하는 시약이나 버퍼에는 문제가 없는 듯 한데 ㅠㅠ gel에 문제일까요 ㅠㅠㅠ 바쁜 시간 내셔서 ...
A.  다른 사람이랑 gel percentage가 다르진 않나요? 8% gel에서는 low MW 분리가 잘 되지 않는게 보통인데, 다른 사람은 잘 되고 본인 것만 안 될 리가...
답변 2  |  2018.03.27
Q. 염석, 투석 후 단백질 로딩에 관해서 질문드립니다.
않더군요. buffer를 더 첨가해서 최대한 묽게 해서 흘려도 잘 로딩이 안되었습니다. 원인이 무얼까 생각을 해봤는데 염석시 단백질 이외에 다른것이 침전된게 아닌가 싶기도 하고 투석이 제대로 되지 ...
A.  투석을 한 후에는 원심분리를 하고나서 전기영동 하면 됩니다.
답변 1  |  2010.01.27
Q. 웨스턴 전기영동 로딩
하지만 계속 로딩다이가 퍼지네요 밴드는 뜨기는 하는데 로딩이 깔끔하게 내려오지않아 조금 불편하네요 도대체 뭐가 문제일까요? ...
A.  SDS-PAGE를 마치고 염색해보면 어떤가요? 밴드가 선명하게 잘 전개되었나요? 그러면 dye가 퍼지는건 문제가 안됩니다. 문제는 dye도 퍼지고 밴드도 전개가 안되는게 문제입니다.
답변 3  |  2012.05.23
Q. 웨스턴 로딩
웨스턴 전기영동 로딩하는데 로딩다이가 퍼지네요.. 몇주전만해도 깔끔하게 나왓엇는데.. 러닝버퍼랑 젤 만들때 들어가는 버퍼들의 pH는 다 맞췄는데... 뭐가 문제일까요.. 샘플버퍼도 새로 만든거구요..
A.  높은 %의 gel을 용할때 BPB dye는 acrylamide %에 비례하여 퍼지는 정도가 심해집니다. 물론 buffer들의 pH 즉 Cl ion의 농도와 전해질인 glycine ion의 농도가 최적으로 맞는다면 퍼지는 정도는 다소 감소합니다만, ...
답변 2  |  2012.04.24
Q. western 에서 샘플로딩양이 많을때
western 하려고 하는데 20ul까지 로딩이 가능한데 샘플양이 30ul 로 양이 많은데 어떻게 해야하나요 먼저 15ul 로딩하고 좀 내려가면 다시 15ul를 하나요? 혹시 단백질 농축할 수 있는 kit도 있나요? 조언부탁해요
A.  그렇게 하시면 됩니다. 먼저 로딩 후 3~5분 running하고 다시 나머지 로딩하면 됩니다. 전체 running time이 1시간 정도이기 때문에 5분 차이는 gel 상에서 전혀 차이 없습니다.
답변 3  |  2009.02.06
Q. 웨스턴 로딩 버퍼
boiling 후에 centrifuge 돌린 다음에 로딩을 합니다. 근데, 젤 로딩시 샘플을 취할 때, 일부 샘플이 튜브 벽에 붙은 겉처럼 남아 있어요. BPB가 꼭 젤리같은 그런 끈적한 느낌으로 남아 있는 거죠. 뭐가 ...
답변 0  |  2007.10.12
Q. 웨스턴로딩시문제점  |  첨부파일 첨부파일
웨스턴로딩을하면이렇게끌립니다. 이유가무엇인지 좀알려주세요
A.  많은 원인이 있어 결과만 보면 알수가 없네요 밴드가 끌리는 이유는 detergent, genomic dna, ph 이런것들이 있어요.. 하나 하나 다시 체크 해보세요.. 그리고 sample 만든후 쎈도리 팍 돌려주고 soup만 이용도 해 ...
답변 3  |  2007.10.12
Q. zymography 단백질 loading
정량하는게 좋을 까요? 안하는게 좋은건가요? 3. 단백질 로딩하실때 어느 정도하시는지.... ? 저는 50ug했는데 밴드가 엄청 진하네요 논문의 몇배는되는듯...;; 4. incubation시간이 중요하다는걸 지금 ...
A.  비례하여 로딩량을 조절해야 합니다. 밴드가 잘 나온다면 로딩량을 줄이시면 되구요, incubation 시간도 조절하여 이쁜 밴드를 만드시면 되겠네요 ...
답변 2  |  2009.06.11
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