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BioLab 장재봉 교수
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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
질문 Ni-NTA regeneration 이해가 안 가네요..
올챙이암세포(대학원생)  |  2022.09.21

안녕하세요?

나름 Histag purification 고인물이라고 자처했는데,,, 아주 기초적인 부분에서 질문이 있어 남겨봅니다.

제 질문은 아래와 같습니다.

 

Elution 후 Ni와 결합한 Imidazole을 어떻게 제거하는가? PBS만으로 왜 제거 되는가?

 

저는 보통 Elution 후에 아예 Ni를 없애버리고, recharging 하는 방식을 썼었는데,

이게 Elution 후에 그냥 PBS로 washing만 하고 (Ni 유지), 다시 써도 되더라구요;;;

그렇다면 PBS washing이 Ni와 결합한 Imidazole을 고효율로 씻어내렸다는건데…

그게 가능한가요? Imidazole과 competition하는 내 histagged 단백질은, PBS washing에 끄떡없는데 말이죠?

혹시 소중한 지식 있으시면 나눔 부탁드립니다.

 

*참고) resin capacity는 거의 60 mg 이었고, 그거 다 잡고 PBS washing 후 flowthrough 30 mg정도 또 잡음. 그 외에도 엄청 많이 사용하는데 계속 됨;;

#histag
#Ni-NTA
#purification
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