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 전체 > Molecular Biology-RNA > Small RNA Analysis
질문 miRNA reverse transcription & assay 질문드립니다.
알nodneb(대학원생)  |  02.25 14:05

안녕하세요. 석사과정 대학원생입니다.

곧 miRNA assay를 할건데, 그 전에 cDNA 합성에 관해서 확인받고 싶어 질문을 드립니다.

 

1. cDNA를 합성하고 deep freezer (-80도)에 하루 보관했다가 다음 날 PCR 실험을 해도 괜찮을까요?

 

그리고

 

2. total RNA로부터 농도 계산해서 역전사 반응을 하기까지 계산 과정을 검토해보려 합니다.

 

지금 있는 샘플의 total RNA 농도를 먼저 nanodrop으로 쟀더니

260nm/280nm = 1.85, 260nm/230nm = 2.15 가 나왔고요.

농도는 147.66 ng/ul이 나왔습니다.

 

근데 kit 설명대로 5 ul에 1~10ng의 total RNA가 있어야 한다고 해서

10 ng만큼 있도록 (2 ng/ul) 희석해주려 합니다.

 

그래서 2 ul total RNA + 145.66 ul RNase free water 해주면 2 ng/ul가 된다... 이 과정에서 혹시 틀린 게 있을까요?

 

 

글 읽어주셔서 감사합니다.

#micro RNA
#real-time pcr
#reverse transcription
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