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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
질문 Phenol chloroform precipitation 어떻게 하는 건가요?
알우으앙(대학원생)  |  02.18 16:31

Restriction enzyme reaction 후에 gel elution으로 뽑았는데 loss가 많다고 PCI를 이용해서 하라고 하셔서 하는데 실험이 실패한 거 같아서 다시 제한효소 처리 중입니다 ㅠ

제한효소 처리한 plasmid 총 80ul를 d.w를 넣어서 500ul로 맞추고 PCI를 500ul 넣어서 1ml를 만든 후에 원심분리를 8000rpm으로 5분 하고 반복을 두 번 더 하라고 하는데

이때 상층액은 얼마 정도 뽑아야 하나요? 최종 supernatant를 450ul 뽑으면 된다길래 그렇게 하려고 했는데 자꾸 밑에 층에 팁이 닿더라고요... 그래서 점점 더 적게 옮길수록 마지막에 450ul 따는 건 불가능할 거 같은데...

그리고 마지막에 450ul 따면 총 볼륨 10%가 되게 50ul 3M NaOAc를 넣고 1ml 95% ethanol을 섞고 영하 80도 30분 보관하고 원심분리 12000rpm 30분하고 70% ethanol washing 하고 말린 후에 물 넣으면 된다는데 450ul 따는 과정까지 어떻게 해야 성공할 수 있나요? 반복하는 과정에서는 그냥 밑에까지 팁 안에 들어와도 신경 안 쓰고 반복해서 aqueous solution의 양을 늘린다는 느낌으로 하는 건가요?

#DNA
#phenol
#chloroform
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