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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
질문 His-tag purification 에서 incubation
알Eternal sonata(대학생)  |  2019.09.18

안녕하세요?

학부연구생으로 연구 진행중에 있는데 His-tagged protein 정제 관련해서 질문드립니다.

이전에 MBP tag를 이용한 정제는 해보았는데, His-tag 는 특이적으로 바인딩하는것이 아니라 단백질의 다른 His 잔기가 binding 할 수 있어 이후에 이온교환 크로마토그래피 등으로 추가정제를 해야 한다는 것은 알고 있습니다.

MBP 정제시엔 resin에 binding, washing, elution 과정에서 각 스텝당 1시간 이상 shaking incubation (4도씨) 했었는데 His-tag 정제시에는 Binding 스텝만 30-60 min incubation 한 뒤에, Washing / Elution 스텝에서 incubation 하지 않고 인버팅만 하나요?

그리고 정제 이전에 sonication으로 cell lysis 후, centrifuge 하여 supernatant 만 injection 할 때 injection 이전에 syringe filter 과정이 필수적인가요?

의견 남겨주시면 감사하겠습니다.

#Histag
#purification
#protocol
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