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질문 TEM으로 E. coli 에서 glycogen관찰
알butandbut(대학원생)  |  2019.08.17
첨부파일 파일첨부: 제목 없음.jpg (66 KB)
이미지 첨부파일

TEM을 통해 E. coli mutant에서 glycogen이 얼마나 많이 형성되었는지 확인하려고 합니다.

실험의 전반적인 과정은 다음과 같습니다.

--------------------------------------------------------------------------------------------------

-0.1 M sodium cacodylate로 세척.

-2.5% glutaraldyhyde in 0.1M sodium cacodylate로 전고정

-2% Osmium Tetroxide (OsO4)1시간 후고정

-ETOH 50%부터 100%까지 탈수

-Epoxy resin을 사용하여 블록(block) 형성.

-80 nmsection

-Ultrathin section: Cu grid를 사용하여 실시

-2% Uranyl acetate 용액으로 염색

-1% Lead citrate 용액으로 2분간 마지막 염색

---------------------------------------------------------------------------------------------------

TEM결과를 보시면 뭐가 glycogen인지 알 수가 없습니다.

(세포 내에는 dry cell weight 기준 약 40%가 glycogen으로 분석이 되었습니다.)

 

1. glycogen이 얼마나 형성되었는지 어떻게 해석을 할 수 있을까요?

2. TEM을 통해 glycogen을 볼 수 있는 다른 염색법을 사용해야 할까요?

 

좋은 답변 부탁드리겠습니다.

#TEM
#E. coli
#Glycogen
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