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 전체 > Molecular Biology-DNA > Sequencing
질문 plasmid DNA one-cut 제한효소 처리결과 질문입니다.
나무  |  2016.11.07
첨부파일 파일첨부: glp1 결과.png (737 KB)
이미지 첨부파일
안녕하세요.


최근에 다른곳에서 받은  plasmid DNA가 있는데, glycerol에 담겨왔었습니다.
실험에 버퍼에 glycerol이 있는것이 방해가되고 침전이 생기는 것 같아서
isopropanol을 이용한 농축을 하여 다시 DNA를 TE 버퍼에 녹였습니다.

혹여나 DNA에 문제가 생겼을까봐
사이즈 확인 겸, one cut digestion 방식을 이용해
제한효소를 처리하였습니다.

gene은 pb-SP-GLP1인데, 인터넷에서 벡터맵을 찾기어려워
관련 논문에 써있는 제한효소가 kpn1과 Xba1 둘이 있어
실험실에 있는 효소인 xba1을 이용하여 실험하였습니다.

첨부된 사진은 NEB buffer와 BSA를 넣고 세시간, 37도씨 인큐베이션 한 결과입니다.

잡밴드가 줄어들긴했지만 여전히 두줄이 뜨고
사실 사이즈가 4kb정도인줄알았는데, 결과에 의하면 최소 5kb 정도인것 같고
또 이상한것은  one cut을 했음에도 진한밴드가 supercolied line에 뜨는 것입니다.
linear line에 떠야할 밴드역시 10kb...

이 사진의 결과는 제 DNA가 two cut이 된건가요?
위에 떠있는 band가 linear band가 맞다면 제가 가진 DNA가 10kb가 넘는 크기인가요?


 
#DNA
#전기영동
#제한효소
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