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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
질문 PCR reagent 관련
피씨알  |  2006.10.27
요새 PCR로 genotyping을 하는데 어떨때는 나오고 어떨때는 안나오고 의욕상실이네요. 근데 가만 생각해볼때 시약을 새로 다 바꾸면 나올때가 있거등요 그래서 제가 시약 관리를 잘못해서 그런게 아닐까 생각하는데.. DMSO dNTP primer H2O Templetes Taq 를 어떻게 관리하시는지요...제가 하는 방법을 적자면 DMSO 는 실온에 그냥 두고 있구요 dNTP는 4가지를 섞어서 -20 에 보관하다 필요할때 녹여서 쓰고 다시 넣어두고, mixture를 만든다음에 ice에 빨리 꽂아놓을때도 있지만 몇분 아니기 때문에 실온에 둘때도 있어요 H2O는 3차수를 쓰고 있고 Primer는 역시 -20에 보관하다가 쓸때 녹이고 다쓰면 -20 Templetes는 -4에 보관하다 쓸때 실온에 그냥 두고 쓰고 다시 넣어두고 있습니다.. 이전 사람이 genotyping 하던 프로토콜 그대로 따르는데 왜 안되는지 될때도 있고 안될때도 있고 미치겠네요 Sample 문제라고 생각될때도 있는데 tail lysis를 와 proteinase K를 넣어서 하루 overnight시켜요 그걸 팁으로 끌어들이구요. 그다음 에타놀 넣어서 센트리퓨 워싱워싱 근데 나중에 H2O로 희석을 시킬때 보면 불순물이 많네요..proteinase K가 오래된거라고 프로토콜보다 2배 비율로 넣어주는데 그래도 가끔 보면 꼬리가 안녹아 있는게 있습니다..그것도 문제인가요..그래서 제가 손가락으로 톡톡쳐서 풀기도 하는데 그게 문제가 될 수 있나요? 아무튼 가능성 있는 코맨트 무엇이든 부탁드립니다..헬프미~
#PCR
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