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질문 DNA 침전의 원리와 방법에 대해서 질문 드려요..
알BBangDDu  |  2009.04.01 23:14
아무리 찾아봐도 없어서 질문드립니다.

어떤식으로 침전이 이뤄지는지 그리고 어떤 방법이 있는지 답변 꼭 부탁드려요..ㅠㅜ
#DNA
 
#DNA 침전
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리발그런  |  2009.04.02   

DNA는 적당한 농도의 알콜 하에서 침전이 일어납니다.
이때 DNA가 침전이 되는데는 고농도의 salt가 필요한데 보통 sodium acetate가 많이 쓰이는 편이지요~

DNA가 녹아 있는 용액에 ethanol을 넣어 70%로 만들어주고 이때에 sodium acetate를 같이 넣어주면 DNA가 용출이 됩니다.
이것을 센도리 돌려서 pellet을 얻으면 이것이 DNA가 됩니다.

알콜침전법 혹은 구글에서 ethanol precipitation로 검색해보면 많은 자료가 나옵니다.

알BBangDDu  |  2009.04.02   

아~ 답변 감사드립니다.

그런데요 원리는 어떻게 되는건가요?? 방법은 디게 많은데요 원리는 잘 없어가지고 이렇게 다시한번 여쭤보네여..

알Yes  |  2009.04.02   
DNA는 수용액에서 이산기가 해리되어 있기때문에 음전하를 가지게 됩니다. 이때 DNA를 물에 안 녹는 상태로 침전을 시키기 위해서는 음전하를 blocking 해야 합니다.
많이 사용하는 시약은 Na, K 가 유리되는 물질을 많이 사용하는데 Sodium acetate, potassium acetate, sodium chloride 등이 있습니다. DNA 용액 볼륨에 위의 용액을 1/10로 넣고 잘 섞은후 2~3볼륨의 EtOH를 넣게 되는데 이때 들어가는 EtOH의 역할은 물과 수소결합을 하고 있는 DNA에서 물분자와 수소결합을 끊어 불용성 물질로 만들어 침전이 되게 합니다.

대충 원리는 이렇습니다 그리고 방법에는


일반적으로 DNA를 침전시켜 농축시킬 때는 위와 같은 alcohol 침전법을 많이 사용한다. 주로 ethanol이 많이 쓰이며, 알콜 침전시에는 monovalent salt ion(sodium이나 potassium 등)이 필요 한데, 위와 같이 여러 가지를 쓸 수 있으며 목적에 따라서 필요한 것을 골라서 쓸 수 있다. 예를 들어 전 단계까지 SDS (sodium dodecyl sulfate)를 쓴 경우는 용액에 SDS가 들어 있으므로 sodium chloride(NaCl)을 salt로 쓰는 것이 좋다.
또한 ammonium acetate는 deoxyribonucleoside triphosphate(dNTPs)의 침전을 막는다. 또한 reverse transcriptase, DNA polymerase, terminal transferase catalyed reaction의 산물로부터 unreactive triphosphate를 제거하기에 유용하다. 전형적으로 이 과정의 침전은 약 99%의 dNTPs 를 제거할 수 있고 90% 이상의 DNA를 얻을 수 있다. 그러나 DNA가 phosphorylated 또는 tailed 되어있다면 ammonium acetate는 사용되어서는 안 된다. 왜냐하면 이 과정에서 필요한 enzyme을 ammonium ion이 방해하기 때문이다.
일반적으로는 ethanol과 sodium acetate의 조합을 가장 많이 쓴다.


이렇게 되겠습니다.
대왕개구리SPEED  |  2009.04.02   

DNA 침전에는 salt와 극성 용매가 필요합니다.

1. Salt

역할 : negative charge blocking

종류 : Na+, K+

농도 : 보통 DNA soln. vol.의 1/10사용

          NaOAc, KOAc : 3M stock 사용

          NaCl : 5M stock 사용

2. 극성 용매

역할 : DNA-물과의 수소결합 blocking

종류 : iPA, EtOH

농도 : 보통 DNA soln. vol.의 0.7~1vo.(iPA)사용 또는 2~3vol.사용(EtOH)

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