실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
In fusion cloning Vector 준비.
레벨4 이드 (대학원생)
안녕하세요. cloning 실험중인 대학원생입니다.
In fusion cloning 준비할 때, Insert 부분은 primer로 추가서열 합성하여 준비한다고 쳤을 때
Vector부분은 어떻게 linear form으로 준비를 해야하나요?
일반적으로 사용하는 restriction site는 sticky end를 사용을 할 텐데,
제한효소 처리를 해서 sticky end로 만들면,
5' ~ 15bp ~AAATTT 3'
3' ~ 15bp ~TTTAAA 5'
라고 하였을 때, 보통은
5' ~ 15bp ~AAATT 3'
3' ~ 15bp ~T 5'
이렇게 남잖아요.
그럼 Insert는 앞쪽 1~15 base중 6~15인 10개와 AAATT 까지 총 15를 사용하는지
아니면 앞쪽 15bp를 In fusion site로 사용하고 +AAATTT+Insert 가 되는지 궁금합니다.
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