실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
클로닝 시 시퀀싱에서 막힙니다.
레벨1 부트라게뇨 (과기인)
유전자 클로닝을 두가지 동시에 진행을 하고 있는데요.
ligation 후에 transformation하여 prep 하고 gel을 내려보면 insert band가 관찰이 됩니다.
그래서 두 가지 모두 sequencing을 맡겼는데, 분석 결과를 보면 insert가 들어가지 않고 vector 끼리 다시 ligation 되었는지 온전한 vector 서열이 나옵니다. 제가 inverse PCR로 vector를 잘랐기 때문에 사라져야 할 부분이 있어야 하는데 sequencing 결과에는 온전한 vector 서열이 나옵니다.
클로닝의 어떤 부분에서 문제가 되어 ligation이 안되는 걸까요?
troubleshooting 하고 싶습니다ㅜ
Bio마켓 프리미엄