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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 클로닝 시 시퀀싱에서 막힙니다.
알부트라게뇨(과기인)  |  03.06 13:32

유전자 클로닝을 두가지 동시에 진행을 하고 있는데요. 

ligation 후에 transformation하여 prep 하고 gel을 내려보면 insert band가 관찰이 됩니다. 

그래서 두 가지 모두 sequencing을 맡겼는데, 분석 결과를 보면 insert가 들어가지 않고 vector 끼리 다시 ligation 되었는지 온전한 vector 서열이 나옵니다. 제가 inverse PCR로 vector를 잘랐기 때문에 사라져야 할 부분이 있어야 하는데 sequencing 결과에는 온전한 vector 서열이 나옵니다. 

클로닝의 어떤 부분에서 문제가 되어 ligation이 안되는 걸까요?

 

troubleshooting 하고 싶습니다ㅜ      

#cloning
 
#sequencing
 
#ligation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

inverse PCR했으면 제한효소 처리 후 gel 확인 시 vector의 사이즈가

줄었는지와 insert 두가지를 정확히 확인한 후 염기서열 분석을 의뢰해야

합니다.

대왕개구리SPEED  |  03.06 15:18  

prep 하고 gel을 내려보면 insert band가 관찰이 된다구요?

설마요.. ㅎㅎ

restrict enzyme 처리 후에 insert band가 보이시는 건가요?

난난  |  03.06 19:06   
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