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질문 PBMC Cell Counting 문의
알꼬맘(과기인)  |  03.05 09:47

안녕하세요.

PBMC 추출하는 작업에 관련하여 Cell counting 시 세포 수 기준에 따른 방식 문의드립니다.

제가 할 일은 PBMC 제작을 위한 CPT Tube수령 후 PBMC제작하여 보관하는 일 입니다.

조건은 다음과 같습니다.

1. 세포수는 5.0*10^6 Cells / mL
2. 만일 세포수 기준으로 소분하는 과정에서 0.5mL 미만로 용액이 남을 경우 기존 PBMC 소분된 Vials에 추가로 소분, 0.5mL 이상으로 남은 경우 1Vial에 별도 소분

예시 ;
대상자 채혈 후 PBMC 제작하여 세포 수 확인한 결과, 13 * 10^6 Cells 가 나온 경우
이를 Freezing medium 2.6mL 로 희석하여 총 3Vials에 각각 5.0*10^6 Cells가 1mL 담긴 Vial 2개, 3.0*10^6 Cells이 0.6mL 담긴 Vial에 1개로 소분함.

그렇다면 세포 수 카운팅된 것을 5.0*10^6 Cells / mL 로 작성하면 될 지?

혹은 5.0*10^6 Cells 2개, 3.0*10^6 Cells 1개 로 작성하면 될 지?

PBMC 제작된 것을 동결한 뒤 사용하여 분석하는 경우에는 Freezing medium은 녹여서 pallet 만들고 상층액 다 버린 뒤 1ml의 thawing medium을 넣어서 분석 준비를 하게 되는 게 맞나요?


#PBMC
 
#CELL COUNT
 
#cells/mL
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

Cell number를 맞춰서 얼리는 이유는, 불필요한 양을 최소화하고 필요한 양만큼을 사용하기 위함입니다. 보통 한번 cell을 얼렸다가 풀경우 cell 수율이 65~70% 정도로 잡습니다.

 

따라서, cell을 얼릴때 정확한 number를 기입하는게 좋습니다.

5.0*10^6 Cells 2개, 3.0*10^6 Cells 1개 로 작성하시고, 같은 cell 이기 때문에,

동이란 rack에 보관하거나, 얼린 일자와 sample 명을 기입하시면 될 것 같습니다 (기본).

 

그리고 얼린 cell을 사용할때는 저의 경우 다음과 같이 진행하였습니다.

 

15ml tube에 media 9ml 넣고, 얼린 cell을 37'C 에서 녹인 후 media가 들어있는 15ml tube에 옮긴다음 cell에 맞는 rpm과 time으로 centrifuge 후에, sup을 제거합니다.

 

그리고 pellet은 1ml의 media를 첨가하여 분석을 합니다.

도움이 되셨기를...  |  03.05 16:38   
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