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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 Glycerol stock에 대해 자세히 여쭤보고 싶습니다.
알물화생(일반인)  |  03.05 00:03

경기도의 한 자공고에 재학 중인 고등학생입니다.

저희 동아리 활동을 통해서 Glycerol stock을 진행해보려합니다.

Glycerol stock에 대한 간단한 과정은 알지만 고등학생인지라 세부적인 사항은

잘 알지못하여 이렇게 문의 드립니다.

1. Glycerol stock 과정에서 DW와 Glycerol 을 섞은 후 오토클레이브로 꼭

   멸균해야 하나요?

   오토클레이브는 있으나 꼭해야하는 이유를 알고 싶습니다.

2. 저희 학교에서 -80°C로 균주를 저장할 방법이 없어 -20°C에 저장하려하는데

   이럴 경우 적당한 DW와 Glycerol의 비율은 어떠한가요?

3. 저희는 액체상태의 배지에 담겨져 있는 E.coli를 Glycerol stock 하려하는데

   액체상태의 E.coli를 원심분리기에 넣고 분리하여 균만 사용해야하나요?

   분리해야한다면 액체 배지 속 균을 원심분리기로 분리하는 방법도 알려주시면

   감사하겠습니다.

4. 마지막으로 Vertexing 과정을 쉐이커를 이용해야만 하나요?

   다른 방법은 없을까요?

항상 여러분들께 많은 것을 알아가는거 같아 정말 감사드립니다^^

#Glycerol stock
 
#E.coli
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 예.
glycerol이등 물이든 다른 세균이나 곰팡이가 오염되지 않아야 하니까요.


2. 보통 glycerol 10-20%를 사용합니다.


3. 액체상태로 키운 것 80 + 100% glycerol 20 으로 섞으면 됩니다.
(또는 90 + 10)
반드시 세균만 사용하는것이 아니고 세균을 원심분리하고 새 배지를 넣은 후 glycerol을 넣어도 되구요.


4. 튜브에 세균과 glycrol을 넣은 후 micropipetting을 해줘도 됩니다.


* glycerol은 100% 일때 매우 끈적거려서 정확한 부피를 취하기가 어렵습니다.
그래서 보통 물과 반반 섞어서 50% 로 만들어고 멸균해서 사용합니다.
50% glycerol은 끈적이지 않아서 사용에 편하지요.

대왕개구리강시  |  03.05 09:53  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

제가 사용하는 방식으로 알려드릴께요

1. Glycerol stock 과정에서 DW와 Glycerol 을 섞은 후 오토클레이브로 꼭

   멸균해야 하나요?


 저의 경우 배양액 (균체+배양액)을 저장할때는 100% glycerol을 멸균하고, 균체만 따로 저장할때는 20% glycerol을 멸균합니다.


2. 저희 학교에서 -80°C로 균주를 저장할 방법이 없어 -20°C에 저장하려하는데

   이럴 경우 적당한 DW와 Glycerol의 비율은 어떠한가요?


 위에 답변주신분 말씀처럼 10-20%를 사용합니다만... 저는 20%를 주로 사용합니다.


3. 저희는 액체상태의 배지에 담겨져 있는 E.coli를 Glycerol stock 하려하는데

   액체상태의 E.coli를 원심분리기에 넣고 분리하여 균만 사용해야하나요?

   분리해야한다면 액체 배지 속 균을 원심분리기로 분리하는 방법도 알려주시면

   감사하겠습니다.


배양액 (균체+배양액) 상태로 저장을 하실거면 우선 균주를 전일 접종하고 배양된 상태에서 진행하셔야 합니다. 배양되고 몇일 경과된 것은 부적합합니다. 균주의 저장은 배양활성이 좋은 균주를 저장하는 것을 원칙으로 합니다.

배양액을 저장할 경우에는
  저의 경우에는 멸균된 20% glycerol 200uL를 멸균된 e-tube에 넣고 배양액 800uL를 넣어준 후 vortex mixer를 이용해서 교반하신 다음에 -20'C에 넣어 보관하시면 됩니다. 
  저장 균체량을 늘리고 싶다면 800-1000uL의 배양액을 원심분리하여 상등액을 제거하고, 다시 배양액 800ml을 넣어서 부유한 다음에 그 안에 20% glycerol 200uL를 넣어준 후 vortex mixer를 이용해서 교반한 후에 -20'C에 넣으시면 됩니다.

만약에 agar plate상의 colony 를 그대로 저장하고 싶다면... 멸균된 백금이를 이용해서 colony들을 긁어모아서 20% glycerol 1ml에 풀어서 -20'C에서 저장하시면 됩니다.

유리구슬에 glycerol+배양액을 뭍혀서 저장했다가 1개씩 꺼내쓰기도 합니다만... 이건 -80'C에서 저장하셔야 합니다.  


4. 마지막으로 Vertexing 과정을 쉐이커를 이용해야만 하나요?

   다른 방법은 없을까요?

Vortex mixer가 없다면 micropipette으로 섞을 수 있습니다. 아니면 손으로 흔들어도 됩니다 (액상배지를 이용할 경우 glycerol과 섞고 손으로 흔들어도 됩니다. colony를 섞을 경우에는 loop를 이용해서 계속해서 덩어리를 완전이 풀어주셔야 합니다.


꽃개구리Applied_Microbe  |  03.05 11:57  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

위 본문을 작성한 사람입니다.

마지막으로 한가지만 더 여쭙고 싶습니다.

위 답변에서는 Glycerol 희석액 200㎕에

배양액 800㎕를

섞어만든다고 하셨는데요.

이렇게 적은 양으로도 추후 보관된 균주를 다시 배양할 때

많은 양으로 배양할 수 있나요?

혹시 균주를 보관하는 양을 늘리면 안되나요?

또, 동결 보관된 균주를 다시 배양하는 과정도 정확히 알고 싶습니다.

다시 한번 부족한 저에게 답변해주시는 여러분께 정말 감사드립니다.

알물화생  |  03.06 22:18  
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