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TRIZOL 추출
- RNA 농도는 cell농도에 의존
- Purity : TRIZOL 처리 후 ice에 20~30분 냉각 후 13krpm, 15분 이상 원심분리
원심분리 후 sup의 max ~70%만 회수
SPIN column 추출
- RNA 농도는 cell 농도 및 elution 시 37도 15~20분 incubation 후 elution
그리고 총 elution vol.을 2회로 나누어 elution
Trizol을 이용한 Phase separation방법은 Phenol성분 contamination때문에 높은 순도의 RNA를 추출하기가 어렵습니다.
kit방식을 사용했을때 RNA추출이 적게 된것은Lysis문제일 가능성이 높습니다. Trizol의 경우 강력한 Lysis능력으로 이런 부분을 극복하게 됩니다.
문제를 해결 할 방법은 두가지가 있습니다.
첫번째는 기존방법을 고수하되, 문제가 일어난 부분을 해결하는것입니다. 예컨대 Trizol 추출의 경우 이후 RNA Clean & concentrator같은 Clean up kit를 사용하여 순도를 높이는 방법과, kit추출의 경우 Kit사용전 Bead beater등을 이용해 확실한 Lysis이후 RNA를 추출하는 것이지요.
두번째는 두 방식의 장점을 합친 제품을 사용하는겁니다.
Direct-zol(http://www.kyongshin.com/productview.php?pd_id=96)이라고 미국 zymo사제품인데 Trizol샘플에서 RNA를 Column을 이용해 층 분리 안하고 추출하는 겁니다. 물론 Washing과정에서 Phenol성분은 제거되구요.