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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 Co-IP를 하고 나서 Western blot을 할 때
알저왕초보요(대학생)  |  02.25 00:01

안녕하세요. 이런 질문을 하는 것이 너무 기초도 안 되어있고, 시간을 들여 공부를 하지도 않고 물어보는 것 같아서 조심스럽습니다.


다만, 이 지식을 찾는데에 있어서 제가 가진 지식이 너무 전무하여, 시간이 많이 소요되고 급히 알아야하는 지식이라 실례를 무릎쓰고 Bric의 고수분들에게 도움을 요청하고자 문의글을 올립니다.


질문은
1) Co-IP후 Whole cell lysate(WCL)을 따로 보관해서 Western blot을 할 때, WCL도 같이 걸어서 확인해서 얻는 이점은 무엇인지 궁금합니다.


2) Western blot을 Flag를 확인하는 목적은 Protein-Protein interaction이 발생했을 경우, DNA insert를 통해 유도한 단백질(Flag가 붙어있는)이 특정단백질과 interaction을 했을경우, 그 비율을 확인하기 위함에 목적이 있는 것인가요?
(즉, PPI가 없었던 애들은 PPI가 있었던 애들보다 비교적 kDa가 낮은 곳에 있기때문에 높은 애들과 낮은 애들간의 비교를 통해 PPI가 어느정도인지 판단하기 위함인지 궁금합니다.)


3) 또 가끔씩 Protein을 뽑을 때, M2-Bead(?)라는 것이 있고, antibody도 M2라는 것이 있던데, 여기서 쓰이는 M2는 같은 것을 뜻하는건가요? 그렇다면 M2가 Tagging으로 쓰이는 것이고, Protein을 뽑을 때, Protein에 Tagging된 M2를 M2-bead를 통해서 뽑고, Western blot으로 확인하는 것도 Protein에 Tagging된 M2를 M2 antibody를 통해서 Confirm하는 것인지 궁금합니다.


너무 기초적인 것을 질문하는 것 같아 죄송합니다.
혹여나, 지식을 전달함에 있어 준비가 부족한 점이 있다면, 제가 참고해 이 지식들을 정리할 수 있는 자료만이라도 남겨주시면 감사하겠습니다.

#Co-IP
 
#WCL
 
#FLAG
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