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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 Western blot중 size marker흐려짐
알랴온(대학생)  |  02.15 09:31

western blot 실험중에 Transfer를 하고나서 Membrane을 보면 이때 까지만해도 진하게 남아있는데 PBST로 Wash를 하면 할 수록 size marker 색이 흐려집니다.

Marker의 흐려지는 사이즈는 50~10kD입니다.

Marker의 양을 늘려서 로딩했음에도 불구하고 Marker 가 빠지는 현상은 그대로 입니다.

현재 marker는 5µl 로딩하고있습니다.

PBST의경우 20x PBS 50ml , Tween 20 1ml, 증류수 950ml조성으로 만들어서 사용하고있습니다. 

membrane을 wash할때마다 마커가 흐려지건 왜그럴까요...?

#western blot
 
#marker
 
#membrane
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

어느정도 흐려지는거죠?
블라킹 이후 조금은 마커가 흐려집니다.

금개구리안재진  |  02.15 13:09  

마커 확인이 불가능 할정도로 많이 흐려집니다.
250~37kD 정도까지는 별로 안흐려지는데 37~10kD까지는 transfer 직후랑 확연하게 차이가 날정도록 많이 흐려집니다.

알랴온  |  02.15 13:27  

지금 tween 20이 높지는 않습니다.
보통 연구자들이 0.05% ~ 0.1%를 쓰니까요. 그래도 이부분을 0.05%로 바꿔보시고
TBS-T로 바꿔서 진행해보세요.
둘다 비슷하게 빠진다면 특별히 문제가 안될 정도가 아닐까 합니다.
워싱을 하다보면 조금씩은 흐려 지는게 일반적입니다.

금개구리안재진  |  02.15 16:05  

 저도 western을 자주 하긴 하는데, 실험을 처음 배울 때 실험 step을 진행하다보면 marker가
흐려질 수 있으니 transfer 이 후 볼펜으로 marker size 위에 따로 표시를 해놓는 것이 좋다고 해서 그렇게 실험을 하고 있습니다.


 그래서 여태까지 marker가 지워지든 말든 별 신경을 안썼던거 같네요ㅎㅎ;;
필요하시면 볼펜으로 표시해 보세요.

개구리kakaoblack99  |  02.15 17:32  
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