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 전체 > Cell Biology > Transfection
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질문 Antibiotic selection 할때 overgrowth문제
올챙이연연(대학원생)  |  02.13 00:52

안녕하세요. 현제 lentivirus를 만들어서 MOI를 측정하려고 하고 있습니다.
기존에 virus를 처리하고 24시간 후에 antibiotics를 처리했는데 너무 적은 cell 들만 살아 남아서 이번에 48시간으로 하는게 좋겠다는 조언을 들었습니다. seeding을 하고 24시간 후에 antibiotics를 처리하면 그나마 overgrowth가 된 상태로 culture하는 것을 줄일 수가 있었는데 48시간을 처리하려고 하니 overgrowth하는 기간이 길어져서 실험에 문제가 생기지 않을까합니다. 그래서 cell seeding number를 줄여볼까도 생각해봤는데 그렇게 되면 infection rate에 영향을 주지 않을까 걱정이 됩니다. 현재 2백만개의 세포를 깔고 그 다음날 antibiotics를 처리하는데 세포가 많은가요? 이번에는 백만개의 세포만 깔아 볼까 생각을 하고 있습니다.
혹시 이런 문제는 어떻게 하고 계시는지 다른분들의 의견이 궁금합니다.

#virus
 
#infection
 
#MOI
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
lentivirus transduction에 의한 protein expression은 genome integration과정이 필요함으로 통상적인 plasmid transfection에 의한 것보다 느립니다.

제가 lentivirus으로 cell line을 만드는 경우 저녁에 targeting cell에 +add lentiviral particle 한 뒤 다음날 아침에 passage를 합니다.

이 passage를 할 때 targeting cell의 growth rate와 selection(cell 종류에 따라 내성이 틀림으로) 기간을 고려해 passage할 cell 밀도/수를 조절합니다.

cell density가 너무 높을 경우 drug selection이 잘 안 먹히기 때문에 selection이 끝났을 때 confluency가 50-70%면 적절하다고 생각합니다.

add drug는 passage한 다음날 저녁이나 이틀 후 아침에 해주고 있습니다.

MOI측정 때도 이 점을 참고하시면 되겠습니다.

말씀하신대로 초기세포 수를 줄이시고
optimization을 위해 초기세포수 조건을30만 50만 100만 등으로 동시에 진행해 보시길 권합니다.
뒷다리무광  |  02.13 02:19  
네 cell 수를 조절해서 해보겠습니다~
감사합니다.
올챙이연연  |  02.16 05:35  
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