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분화가 잘 되지는 않은것 같습니다.
배율을 좀더 올려서 확인을 한번 해 보세요.. 염색 문제인지..
참고로 3T3-L1 분화 후 사진을 첨부합니다.
3t3-l1은 상당히 민감한 세포입니다.
유지기간동안 한번이라도 contact inhibition stage를 겪었다면
분화유도가 되지 않습니다.
유지는 60%이하일때 계대를 해야합니다. serum은 FBS를 쓰지 않는것이 좋습니다.
BCS 등으로 키우세요.
분화유도시에는 100% confluent상태로 보이고 나서도 3일정도 더 키워야합니다.
그후 조건에 맞는시간동안 적절한 factor들을 첨가하게되면 거기서 한번더 빽빽하게 분열을 합니다. ( mitotic clonal expansion, IBMX, dexametason 등 때문이지요)
serum을 FBS로, insulin을 넣어주고 oil droplet을 관찰해봅니다.
처음에는 세포내에서 작은 기포가 보이기 시작하다가 점점 제들끼리 합쳐지면서 커집니다.
일주일? 정도 배지 잘 갈아주면서 분화유도하면 세포내에 세포만한 oil droplet이 보이기도 합니다.
적당한 시기에 oil red o 염색을 하면되지요.
이 모든 스텝은 세포주가 좋아야 가능하답니다.
제가 봤을때 실험자 님의 세포주는 가망이 없어보이네요.
새로운 세포주를 구입하여 처음부터 배양 유지를 잘 하고 실험에 임하는것이 좋겠습니다.
지방세포 실험은 7여년 전에 했기에 다소 잘못된 정보가 있을 수도 있겟네요~
(참고로 지방분화를 기가막히게 잘 시키는 배지키트도 팝니다. 그걸로 하면 정말 이쁜 결과가 나오더군요~ㅎㅎ - 저는 그쪽계통 일 안하는 일반 연구자입니다~)
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레벨2
신양22
(과기인)
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19.02.08 17:59
감사합니다!