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[학술] Mammalian cell 이 PBS에서 엉기는 현상이 있습니다
회원작성글 크리스12(대학원생)
  (2022-07-27 18:43)

안녕하세요~ 면역학 공부하는 대학원생입니다.

실험실 특성상 B16F10, HeLa 등등 mammalian 유래 cell line들을 많이 다루는데요

계대(subculture)할 때 trypsin으로 cell을 떼어내고,

trypsin을 제거하기 위해 PBS나 media를 추가해서 centrifuge 합니다.

그 후에 supernatant 제거하고 cell pellet을 complete media로 풉니다.

 

trypsin으로 떼어낸 cell들이 있는 용액에 PBS를 추가하면

centrifuge 후에 media로 cell pellet을 풀 때 촤라락 하고 풀리지 않고 엉기는 현상이 있습니다.

media를 추가하면 잘 풀리고요..

 

저희 실험실에서 PBS를 만들어서 쓰는데,, PBS의 문제일까요??

저와 같은 현상을 경험해보신 분 계신지 궁금합니다..



태그  #PBS   #동물세포
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  댓글 5  
구글회원 작성글 BG*********(비회원)  (2022-07-28 09:55)
1
meida랑 PBS랑 조성이 다르니 그럴 수도 있겠죠, 이후 세포 배양하는데 문제가 있었나요?
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회원작성글 크리스12(대학원생)  (2022-07-28 10:40)
2
plate에 깔았을 때 morphology가 예쁘지(?) 않고 좀 지저분하긴 합니다 ㅠ
그리고 뭉쳐있다보니 cell counting할 때도 dilution 용액과 그냥 원액을 가지고 counting했을 때
일관성이 없습니다 ㅠ..
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회원작성글 더잘하고싶다(과기인)  (2022-07-28 10:35)
3
그거 세포 터져서 genomic DNA 노출되서 그렇습니다. Trypsin에 의해서 세포가 상태가 매우 안 좋아졌는데 여기다가 FBS가 포함된 또는 트립신 중화제가 들어간 배양액이 아닌 PBS를 넣게 되면 세포가 퍽 하고 터지게 되고... 그러면 이제 DNA가 나오고 세포가 엉기게 됩니다..

1. 세포가 건강하지 않게 된다.
2. 노출된 DNA에 의해 멀쩡한 다른 세포들까지 석션 등에 의해 손실된다.
3. 균일하게 세포를 분주하고 싶어도 어렵다.

보통 돈을 아끼려는 연구실에서 또는 귀찮음에 저러한 경우들이 생기는데... 실험의 절차에는 그렇게 해야만 하는 이유가 부여 되어있습니다. 그걸 아는 것도 또 하나의 재미가 될 수 있어요.
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회원작성글 더잘하고싶다(과기인)  (2022-07-28 10:36)
4
일단 엉겨붙게 된 세포를 해결하려면 DNAse를 넣고 filter를 통과 시키면 되는데 ㅡㅡ 그럴 돈과 노력 정성 시간이면 트립신 중화제를 쓰거나 FBS를 넣은 배양액을 쓰도록 합시다 ㅎㅎ 실험 절차상 FBS가 들어간 그런 것이 첨가되면 안되는 경우엔 중화제 또는 트립신보다 조금 더 순한 성질의 것들을 찾아서 써보시는 것도 방법입니다..
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회원작성글 크리스12(대학원생)  (2022-07-28 10:41)
5
답변 감사드립니다ㅠㅠ.. 신기하고 재미있는 사실 하나 알아가네요 ㅎㅎ
안그래도 원~래는 media 사용하다가,, fbs랑 media 가격을 알고나서 좀 아껴보려고 그런 거거든요
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