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[별별소리] SDS-PAGE Band 관련 질문입니다.
회원작성글 CDS(대학생)
  (2020-02-19 13:30)
파일첨부 1 : 2020.02.15 Lowry SDS-PAGE.jpg (75 KB)
파일첨부 2 : 2020.02.15 Bradford SDS-PAGE.jpg (68 KB)

이제 막 대학원에 진학한 실험 초보자 입니다.
 

대학원 교수님과 LAB meetiong중 교수님께서 SDS - PAGE 1wall의 한 Band가 얼마를 뜻하는지 물어보셨습니다.

저는 Sample을 1mg/ml로 맞추어 5x Sample buffer를 이용하여 4:1 비율로 섞어 1wall에 10ul씩 넣어서 걸었습니다.

교수님께 위 내용을 말씀드렸고 교수님께서는 Bric에 물어보면 잘 알려주실거라고 말씀하셨습니다.

사실 교수님께서 말씀하신 내용이 제가 이해한게 맞는지도 잘 모르겠습니다.

 

 

대화 내용은 아래 내용과 같습니다.

교수님 - "SDS-PAGE에 한 wall당 얼마씩 걸었는데?"

나 - "10ul씩 걸었습니다."

교수님 - "10ul라는게 Volum말하는거 아니야?"

나 - "네"

교수님 - "Volum말고 단백질양으로 알아야해"

나 - "1mg/ml 입니다."

교수님 - "1mg이면 SDS-PAGE에서 하나의 Band가 얼마가 나오니? 한 Band가 얼마나 나오는지 브릭에 물어봐"

 

 

내용을 읽어주셔서 감사합니다.

선배님들 도와주시면 정말 감사드립니다. ㅠ
 



태그  #SDS-PAGE
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  댓글 10  
네이버회원 작성글 ro*******(비회원)  (2020-02-19 16:45)
1
한 well에 1 mg/ml의 샘플이 8 ㎕, 5x loading dye가 2 ㎕ 들어가 있는 상황이네요. 저 경우 한 well에 8 ㎍의 총 단백질이 들어가 있는 상태입니다.
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회원작성글 CDS(대학생)  (2020-02-19 17:59)
2
감사합니다!
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회원작성글 ㄱㄴㄷ(과기인)  (2020-02-19 22:22)
3
이게 맞는듯 해요...한 웰당 단백질이 8 ug 로딩되는 거죠~ 웨스턴 8ug 걸면 인자들따라 밴드가 잘 안나오는 경우가 많습니다. 보통 30 ug 이쪽 저쩍으로 많이들 로딩하니 아마 밴드 intensity가 약해서 로딩양을 늘려보라는 교수님의 뜻이 아닐지...ㅋㅋ
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네이버회원 작성글 ro*******(비회원)  (2020-02-19 16:48)
4
하나의 'band'를 얘기하는거라면, albumin standard 같은 시약을 통해 일정한 양을 내려 보고, 포토샵 같은 프로그램을 이용해서 젤 사진을 이용해서 야매로 densiometry 진행하여서 몇 ㎍의 단백질 밴드가 이런 intensity를 가진다고 정할 수 있긴 한데, 교수님께서 그걸 의도하시고 물어보신 것 같지는 않네요..
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회원작성글 CDS(대학생)  (2020-02-19 18:00)
5
제가 많이 부족하여 이해를 잘 못했지만 감사합니다!
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회원작성글 당구왕빠킹(과기인)  (2020-02-19 19:15)
6
여담이지만 브릭에 물어보라는 교수님도 계시는군요...
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회원작성글 p....(과기인)  (2020-02-19 22:40)
7
그러게요. 자율 학습을 가르치려고 그러는 건지...
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회원작성글 Tilldawn(과기인)  (2020-02-20 15:48)
8
1 well 당 얼마인지는 윗 분이 잘 말씀해 주셨구요.

교수님의 질문은 1 band 당 얼마인지로 보입니다.

Coomassie staining 할때 맨 왼쪽에 marker 거시는데, 그 marker의 intensity를 보고 대충 알수는 있어도 (제품 설명서에 나온 농도로 현재 gel 에 loading된 단백질 양 추정)

각 band 당 정확한 단백질 양은 알기 어렵습니다.

사족이지만, band를 잘라서 in-gel digetion 후에 질량분석기로 분석하면 다양한 단백질들이 정성되고 그 결과를 통해 상대적 정량비를 구하기도 합니다.
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회원작성글 리처드빱킨스(대학원생)  (2020-02-20 16:27)
9
교수님 나와주세요
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회원작성글 이스(과기인)  (2020-02-21 08:30)
10
살다살다 브릭에 물어보라는 교수님은 또 처음이네...
학생 때 브릭에 작성된 댓글들을 너무 믿지 말라. 브릭을 너무 신뢰하면 안된다.
이런 소리는 많이 들어봤어도,
브릭에 물어보라니요 ㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋ
아이고... 그렇게 가르치기 귀찮으셔서야 학생들 케어가 되시겠습니까 교수님...

교수님왈, "SDS-PAGE에 한 well당 얼마씩 걸었는데?"
뭘 얼마씩 걸었냐고 물으시는 겁니까?
처음부터 protein amount를 얼마나 로딩했냐고 물어보시죠.
volume인지 amount지 초보자가 알겠어요?

교수님왈, 1mg이면 SDS-PAGE에서 하나의 Band가 얼마가 나오니?
이건 제가 들어도 뭐가 얼마나 나오냐는 건지 정확히 알수가 없네요.
그래요. 솔직히 무슨 말을 하고 싶으신지는 알겠어요. 그런데 초보자 잖아요...
학생한테 정확한 표현을 해주시길 바랍니다.
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