[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 커뮤니티
라이카써머캠프
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 소리마당PLUS 학회룸쉐어 Sci카페 SciON(설문조사) BioHelp
조회 1127  인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
[별별소리] western blotting에서 three-layer probing의 프로토콜이 이해가 잘 되지 않습니다.
회원작성글 학부연구생(대학생)
  (2019-11-11 21:33)

1. Place the membrane in the primary antibody solution and incubate with agitation for 1 h at room temperature or overnight at 4°C.
2. Place the membrane in washing solution and wash three times for 5 min per wash.
3. Place the membrane in the biotinylated secondary antibody solution and incubate with agitation for 1 h at room temperature or 37°C.
4. Place the membrane in washing solution and wash three times for 5 min per wash.
5. Dilute the streptavidin-HRP conjugate (or streptavidin CyDye conjugate if using Amersham ECL Plex detection) in PBS-Tween or TBS-Tween.
6. Incubate the membrane in the solution for 45 to 60 min at room temperature on an orbital shaker.
7. Briefly rinse the membrane with two changes of washing solution.
8. Wash the membrane by suspending it in enough washing solution to cover the membrane and agitate for 5 min at room temperature. Repeat the procedure at least four to six times.
9. Continue with detection as recommended for the selected detection reagent and imaging system.

 

https://cdn.gelifesciences.com/dmm3bwsv3/AssetStream.aspx?mediaformatid=10061&destinationid=10016&assetid=15994

여기서 11. 7.2.2입니다.

왜 3layer 라고 명칭이 붙여진지도 모르겠고

다른 probing 단계와의 차이점을 잘 모르겠습니다...

도와주세요 ㅠㅜ



태그  #western blotting   #probing   #3 layer probing
신고하기
목록 글쓰기
  댓글 1  
구글회원 작성글 할라**(비회원)  (2019-11-15 23:14)
1
primary antibody - secondary antibody(biotin-conjugated) - straptavidin(HRP-conjugated) 가 3겹으로 되기 때문에 3 layer 입니다.
아주 흔하게 쓰는 tagging 항체인 HA, Myc 같은 경우에는 곧바로 HRP-conjugated로 사용하는 경우가 있는데 이럴 경우 1 layer가,
그리고 통상적인 primary ab- secondary ab(HRP-conjugated)를 사용하면 2 layer가 되겠네요.
특정 marker를 HRP 반응을 이용해 detection 할 때 Ab를 몇차례 사용하는지로 구분한 듯... 별로 신경쓸 부분은 아닙니다.
댓글리플
  
  신고하기
 
이슈 글타래 보기
 
코로나19 학술토론
 
여성과기인 지원정책 찬반
 
공정한 연구과제 심사·평가
소리마당(전체)  |  오피니언  |  진로  |  학술  |  별별소리
1044
[학술] ATP에대해 궁금한점이 있습니다 (고등학생입니다)
회원작성글 재밌을것...
07.11
29
0
1043
[별별소리] 항생제도 바이오의약품 인가요??? [1]
네넵
07.11
59
1
1042
[진로] 생명공학 진로 진학 고민
회원작성글 cherrym
07.11
33
0
1041
[진로] (아직 고등학생) 진학 후 교토대 의대로 단기 유학 가고싶은데 어떻게 할 수 있을까요?
회원작성글 생명과학...
07.11
39
0
1040
[진로] 인건비 때문에 고민입니다. [4]
회원작성글 레비나스
07.11
215
0
1039
[별별소리] 주간 소식 몰아보기 (2020년 7월 6일~10일)
회원작성글 BioIP
07.11
46
0
1038
[별별소리] 미생물 범위(바이러스는 속하는지..) [1]
회원작성글 미생물1
07.11
99
0
1037
[진로] 석사 진학 1년 공백에 대해서 [2]
123
07.10
150
0
1036
[별별소리] 포닥근무 중인데 자존심이 많이 상합니다.. [5]
포닥초보
07.10
519
0
1035
[별별소리] 각막상피세포의 손상정도를 관찰하려면 어떻게 해야 할까요?
회원작성글 피치블랙...
07.10
52
0
1034
[학술] under review 에서 with editor 로 변경 [1]
랩돌
07.10
230
0
1033
[진로] 컴퓨터 전공 석사 취업 관련문의
회원작성글 바이오핑
07.10
105
0
1032
[진로] 통계학 석사과정중인데요 [4]
회원작성글 지동
07.10
231
0
1031
[별별소리] 작은 파티클같은게 공기중에 보이는데요. [3]
회원작성글 뉴클리어...
07.10
293
0
1030
[별별소리] 7월 10일: 나래미역취#Ovalbumin#산맴돌이거저리#삼채#조릿대
회원작성글 BioIP
07.10
48
0
1029
[별별소리] 소심한 성격 때문에 고민입니다.. [3]
회원작성글 Presearc..
07.10
292
0
1028
[별별소리] 실험이 재미는 있는데 재능이 없는것 같아 진로가 고민되요 [2]
회원작성글 Eden_13
07.09
395
0
1027
[별별소리] 교수님이 저에게 우울증이라고 하시네요.. [8]
회원작성글 0909
07.09
735
0
1026
[별별소리] 7월 9일 : 주요 소식과 한 줄 지적질
회원작성글 BioIP
07.09
81
0
1025
[별별소리] mouse dominance 측정하는 패러다임 중에 mating으로 하는게 있나요?!
회원작성글 연귱이
07.09
53
0
처음 이전  1 02 03 04 05 06 07 08 09 10  다음 끝
(주)비아이코퍼레이션
소리세움
[설문]실험 테크니션(실험·장비 전담운영인력) 종사자 현황 및 인식도 조사
조사기관: ESC열린정책위원회, BRIC
조사대상: 과학기술 종사자 및 실험 테크니션 종사자
조사기간: ~7/16까지
설문참여하기
소리마당 PLUS
포닥나라
해외포닥
남편 포닥으로 미국와서 거지된 사연... [6]
피펫잡는 언니들
[ESC-Live] 코로나19가 불러온 과학기술의 뉴노멀
이직 하려고 할 때. [3]
이 책 봤니?
[홍보] 딥메디슨 - 인공지능, 의료의 인간화를 꿈꾸다
[홍보] 코로나 리포트 - 대한민국 초기 방역 88일의 기록
이 논문 봤니?
[요청] 면역학과 바이러스학
[추천] A SARS-like cluster of circulating bat coronavirus...
Nature Medicine
연구비 부정신고
대학원생119
위로가기
커뮤니티 홈  |  커뮤니티FAQ  |  커뮤니티 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크