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이성원
이성원 (Sung Won Lee) 저자 이메일 보기
세종대학교
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  CV updated 2019-07-23 17:55
 
조회 1389  인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
A carrier-free multiplexed gene editing system applicable for suspension cells
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Abstract

Genetically engineered cells via CRISPR/Cas9 system can serve as powerful sources for cancer immunotherapeutic applications. Furthermore, multiple genetic alterations are necessary to overcome tumor-induced immune-suppressive mechanisms. However, one of the major obstacles is the technical difficulty with efficient multiple gene manipulation of suspension cells due to the low transfection efficacy. Herein, we established a carrier-free multiplexed gene editing platform in a simplified method, which can enhance the function of cytotoxic CD8+ T cells by modulating suspension cancer cells. Our multiple Cas9 ribonucleoproteins (RNPs) enable simultaneous disruption of two programmed cell death 1 (PD-1) ligands, functioning as negative regulators in the immune system, by accessing engineered Cas9 proteins with abilities of complexation and cellular penetration. In addition, combination with electroporation enhanced multiple gene editing efficacy, compared with that by treatment of multiple Cas9 RNPs alone. This procedure resulted in high gene editing at multiple loci of suspension cells. The treatment of multiple Cas9 RNPs targeting both ligands strongly improved Th1-type cytokine production of cytotoxic CD8+ T cells, resulting in synergistic cytotoxic effects against cancer. Simultaneous suppression of PD-L1 and PD-L2 on cancer cells via our developed editing system allows effective anti-tumor immunity. Furthermore, the treatment of multiple Cas9 RNPs targeting PD-L1, PD-L2, and TIM-3 had approximately 70–90% deletion efficacy. Thus, our multiplexed gene editing strategy endows potential clinical utilities in cancer immunotherapy.

Keywords : CRISPR/Cas9; Cas9 RNP; Multiplexed gene editing; Suspension cells; Immune checkpoints; Cancer immunotherapy

논문정보
- 형식: Research article
- 게재일: 2019년 10월 (BRIC 등록일 2019-07-22)
- 연구진: 국내연구진태극기
- 분야: Cancer Biology/Oncology, Immunology
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