[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 sale 회원가입   로그인
BRIC홈 한국을 빛내는 사람들
검색광고안내
산으로 가는 전공 이야기
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 한빛사논문 추천논문 인터뷰 그이후 한빛사통계
조승우
조승우 (Seung Woo Cho) 저자 이메일 보기
서울대학교
저자CV 보기
52 KB
 
조회 6656  인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
Analysis of off-target effects of CRISPR/Cas-derived RNA-guided endonucleases and nickases

Seung Woo Cho1, Sojung Kim1, Yongsub Kim1, Jiyeon Kweon, Heon Seok Kim, Sangsu Bae and Jin-Soo Kim2

National Creative Research Initiatives Center for Genome Engineering and Department of Chemistry, Seoul National University, Seoul 151-747, South Korea

1 These authors contributed equally to this work.

2 Corresponding author

Abstract
RNA-guided endonucleases (RGENs), derived from the prokaryotic adaptive immune system known as CRISPR/Cas, enable targeted genome engineering in cells and organisms. RGENs are ribonucleoproteins that consist of guide RNA and Cas9, a protein component originated from Streptococcus pyogenes. These enzymes cleave chromosomal DNA, whose sequence is complementary, to guide RNA in a targeted manner, producing site-specific DNA double-strand breaks (DSBs), the repair of which gives rise to targeted genome modifications. Despite broad interest in RGEN-mediated genome editing, these nucleases are limited by off-target mutations and unwanted chromosomal translocations associated with off-target DNA cleavages. Here, we show that off-target effects of RGENs can be reduced below the detection limits of deep sequencing by choosing unique target sequences in the genome and modifying both guide RNA and Cas9. We found that both the composition and structure of guide RNA can affect RGEN activities in cells to reduce off-target effects. RGENs efficiently discriminated on-target sites from off-target sites that differ by two bases. Furthermore, exome sequencing analysis showed that no off-target mutations were induced by two RGENs in four clonal populations of mutant cells. In addition, paired Cas9 nickases, composed of D10A Cas9 and guide RNA, which generate two single-strand breaks (SSBs) or nicks on different DNA strands, were highly specific in human cells, avoiding off-target mutations without sacrificing genome-editing efficiency. Interestingly, paired nickases induced chromosomal deletions in a targeted manner without causing unwanted translocations. Our results highlight the importance of choosing unique target sequences and optimizing guide RNA and Cas9 to avoid or reduce RGEN-induced off-target mutations.

논문정보
- 형식: Research article
- 게재일: 2013년 11월 (BRIC 등록일 2015-03-18)
- 연구진: 국내연구진태극기
- 분야: Genetics, Biotechnology, Molecular_Biology
- 피인용횟수: 최근 3년간 60회 이상 인용된 논문
관련 보도자료
유전자 교정하는 'RNA 유전자가위'의 정확성 높여...서울대학교 김진수 교수팀
국내 연구진이 DNA를 잘라 교정하는 유전자가위*의 정확성을 높일 수 있는 방법을 개발했다. 향후 유전자가위를 이용한 유전자 및 줄기세포 치료의 부작용을 줄이는데 크게 기여할 것으로 기대된다.   ...
http://imnews.imbc.com/replay/nwdesk/article/33711...
Dot/Icm 제 4 유형 커플링 단백질 복합체의 선택적 이펙터 단백질 인식[Nat. Commun.]
김현민
발표: 김현민 (KAIST)
일자: 2020년 9월 29일 (화) 오후 02시 (한국시간)
언어: 한국어
참석자 접수신청하기

  댓글 0
등록
 
목록
국립암센터
관련링크
조승우 님 전체논문보기 >
관련인물
관련분야 논문보기
Genetics

Biotechnology

Biochemistry

외부링크
Google (by Seung Woo Cho)
Pubmed (by Seung Woo Cho)
프리미엄 Bio일정 Bio일정 프리미엄 안내
대구경북과학기술원 (DGIST) 뇌·인지과학전공 온라인 전공설명회 개최
위로가기
한빛사 홈  |  한빛사FAQ  |  한빛사 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고