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Cell lysis buffer의 조성을 보면 Isoelectric focusing과정을 거치는 2D-PAGE 실험에 주로 사용하는 것 같습니다. 만일 일반적인 목적으로 western을 진행하실거라면, sample prep도 쉽고 여러 정량법에 적용가능한 다른 lysis buffer (RIPA)를 쓰실 것을 권장합니다.
1. 네 중복되는 것이 맞습니다.
2. 아마 urea의 농도가 높고, bromophenol blue가 있어 이미 색깔을 띠기 때문인 것 같습니다.
- 그 기계는 sonicator라 합니다. water bath로 쏘는 방식은 굉장히 약합니다. lysis에는 역부족입니다.
3. 네 상관 없습니다.
4. 간단히 답해드릴 수 없는 문제입니다만... 같은 목적을 위해 ELISA와 western을 준비하신다면 ELISA쪽이 비용이 더 들어갈 겁니다. Standard, antigen-specific antibody, conjugate antibody를 모두 준비하는 것 보단, 웨스턴을 위해 antigen-specific antibody와 universal 2nd antibody를 준비하는 것이 오히려 더 간단합니다. 물론 실험은 ELISA가 간단합니다.