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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 환자 조직에서 RT-PCR했을때 b2-microglobulin 양이 다릅니다.
PCR!!!  | 2009.08.18 11:11
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
첨부파일 파일첨부: b2-mg.jpg (10 KB)
이미지 첨부파일
서로 다른 환자 조직에서 RNA뽑아서 RT-PCR했는데 control인 b2-microglobulin양이 다르게 나왔습니다.
제가 실험을 잘못한걸까요?
그렇다면 b2-microblobulin양이 똑같이 나오도록 cDNA양을 조절해서 다른 유전자도 같은 조건으로 실험해야할까요?
파일을 첨부하는데 imageJ 프로그램으로 정량했더니
각각 cDNA양을 8, 1, 6, 1, 812, 1 ul 넣고 PCR해야한다는 계산이 나옵니다.
그럼 5번째 sample은 어떻게 해결해야할지...
그런데 5번째 sample로 다른 유전자를 봤을때는 band가 잘 나옵니다...
많은 조언 부탁드립니다 ^^
#조직
 
#RT-PCR
 
#microglobulin
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이sm226  |  2009.08.19   
cDNA synthesis를 들어갈때 들어가는 RNA 양 그리고 PCR에 들어가는 cDNA양은 모두 동일하게 들어가야 합니다.
그렇게 하셨는데도 이런 결과가 있다면 다른 control을 한 번 써보시지요...
이론적으로는 house keeping gene이 영향을 받지 않아야 하지만, 100% 꼭 그렇다고 말할수는
없기에 두개 많게는 세개정도 control을 측정하셔서 그중 하나 고르시는게 좋지 않을까 생각해봅니다.
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