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 전체 > Molecular Biology-DNA > Southern Blot Analysis
조회 4267  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 southern blot 시에 biotin probe
올챙이석사초년생  |  2009.08.14 13:07
안녕하세요

southern blot을 하고 있는 학생입니다...

NEB star phototope kit을 이용해서 template + biotin dNTP + klenow 를 이용해서 probe를

제작하는데요..;; 제가 가지고 있는 프로토콜을 보면 EtOH precipitaion 시에

4M LiCl을 final 0.4M이 되도록 넣고 ethanol 넣고 -70 deg. 에 넣습니다..

template로 DNA를 쓰는데 왜 0.4M LiCl을 이용해서 침전시킬까요....

좀 알려주세요...프로토콜이 잘못 된것 같진 않은데...

또 하나 더 질문 할게요..;; film develop 시에 보면 gel이 membrane에 닿았던 부분만

검게 변합니다. membrane 양 끝쪽은 (transfer 시에 gel과 닿지 않은 부분) 깨끗합니다..

왜 이럴까요..;; 알려주세요.ㅠ.ㅠ 
#southern
 
#film
 
#biotin
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2009.08.14   

침전시 salt로서 sodium acetate나 ammonium acetate를 쓰는 경우도 있고 NaCl이나 LiCl을 쓰는 경우도 있습니다. 권장하는 방식이 LiCl이므로 이를 따르는 것이 좋을 것 같습니다.

Gel이 닿았던 부분에서 agarose성분이 들러붙어 background로 나타날 수 있습니다. 따라서 hybridization을 하기전 충분히 잘 닦아주어야 합니다.

올챙이석사초년생  |  2009.08.14   

agarose 성분 때문에 생길 수도 있는 것이었군요..;;;흑..

감사합니다~~~

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