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| 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR |
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mouse 조직에서 RNA 추출할때 |
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도와주세요~ | 2009.08.10 17:58
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답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의) |
안녕하세요
mouse 간, 지방, 근육에서 RNA 추출해서 RT-PCR을 하려고 합니다.
그런데 여러가지 문제가 좀 있어서 도움을 청합니다 ㅠ.ㅠ
1. 먼저 actin으로 control을 잡았는데 샘플마다 actin양이 다릅니다
RNA 농도 다시 잰다음 RT도 다시 해서 봤지만 같은 결과입니다.
이런 경우 어떻게 하시나요?
2. RNAlater 처리해서 얼려논 조직을 한번 녹여서 반쯤 사용하고 다시 얼려놨는데요
이거 다시 녹여서 써도 RNA 뽑는데 문제 없나요?
3. 지방 조직에서 RNA 뽑을때 잘 뽑는 tip이 있으면 알려주세요 ㅠ.ㅠ
처음 해보는거라 쉽지않네요 ㅠ.ㅠ
제발 도와주세요~
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 ppiki | 2009.08.10
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1. 동량의 RNA로 RT를 하셨을 테니까..다르다면...GAPDH를 사용해보세요..
그리고, actin의 경우 heart 나 skeletal muscle 같은 cell들은 두가지 transcript를 가진다는 보고가 있습니다. 그래서 northern을 해보면 다른 조직에서는 한가지 band가 나오지만 그런 조직에서는 두개의 band가 나오는경우가 있습니다.
2. 아무리, RNAlater를 사용하였더라도 한번 녹였다가 다시 얼린건 아무래도 안좋겠죠.. 그러나 RNA 추출하는데는 문제없고, northern의 경우에는 smear가 많이 생길겁니다. 그러나 RT-PCR정도는 별 문제없는것 같습니다.
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