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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 Real time PCR 과 일반 PCR
PCR입문  |  2009.08.05 16:20
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
이제 PCR을 시작하는 초보입니다.

세포를 lysis 하여 RNA를 뽑은후 cDNA로 합성하여

Real time PCR을 했습니다. primer는 GAPDH, A, B 라는 gene 으로 하였을때

GAPDH와 비교하여 B는 거의 뜨지 않고 A라는 gene이 많이 발현되었습니다.

동일 sample로 일반 PCR을 하여 증폭시킨 뒤 agarose gel에 걸었습니다.

당연히 A라는 gene과 GAPDH가 진하게 band가 뜨길 바랬지만

B라는 gene까지 모두 비슷한 굵기로 band가 떳습니다.

이 현상은 왜 일어나는 건지 궁금합니다.

real time PCR protocol과 그냥 PCR protocol이 좀 다르긴 했지만

그래도 sample 입장에서는 같은 조건으로 PCR을 했기 때문에

상대적인 발현양 차이는 보여야 하는게 아닐까...하는게 제 짧은 소견입니다.

답변 부탁드리겠습니다 ^^
#PCR
 
#real time
 
#gene
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개구리겨우살이  |  2009.08.06   
Real time pcr 수행시 형광측정 온도를 ds DNA가 존재하지 않는 온도로 설정해서 그런 것이 아닐까요? real time pcr product로 전기영동을 걸어서 확인해 보시지요
ABC  |  2009.08.07    

일반 PCR시에 saturation된 것으로 생각되네요.
혹 cycle 수가 많았던 것은 아닌지요?

cycle 수를 줄여서 낮은 cycle부터 젤 로딩해 보세요.

PCR입문  |  2009.08.10    
답변 감사드립니다.
두 가지 다 고려해서 다시 해 보겠습니다
감사합니다^^
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