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질문 E.coli에서 효소정제시 sonication
답답이  | 2009.07.17 14:15
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

transformation 시킨 E.coli 에서 효소 추출하고 있는데요..
sonication으로 단백질 깨주는데...
저희 실험실에 있는 소니케이터가 굉장히 오래됬거든요..15년정도 된 모델이라는;;;
끝에 프로브 직경이 3mm 정도구요~
10mL에 소니케이터 끝부분이 거의 잠기게해서 10초 충격주고 50초 쉬어주고 해서...
30분간 하고 있습니다~
파워는 60kHZ로 하고 있구요..
근데 잘 안깨지는거 같아서요...나중에 효소활성 체크해보면 굉장히 낮아서...
문제는 단백질이 덜깨지는것 같아서 그런거 같아요...
소니케이션 파워를 어느정도해서 시간을 얼만큼 해야 하는지...감이 도저히 안잡히네요...
혹시 논문이라도 있는지...정말 답답한 마음에 처음 글 올려봅니다.ㅠㅠ

#sonication
 
#E.coli
 
#효소정제
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2009.07.17   
Q. 근데 잘 안깨지는거 같아서요...

=> 어떤 방법으로 잘 안깨어 진다는것을 확인하셨습니까 ?

Q. 나중에 효소활성 체크해보면 굉장히 낮아서...

=> cell이 많이 안깨어져서 활성이 낮은 경우와 실활이 되어서 활성이 낮은 경우 중 어떤쪽인지

확인하신 방법은 ?
대왕개구리엘피스  |  2009.07.17   

직경이 3mm짜리라면 1ml tube용인듯합니다.
10ml을 깨는 것은 능력밖의 일로 생각이 됩니다만......

직경이 2-3cm의 경우에는, 15초 sonication, 10초 stop, 총 4분정도면 됩니다.

이런 경우, lysozyme (최종 1mg/ml)을 처리한 후 sonication을 해보는 것도 한방법입니다. 그리고 probe가 작은 이상 작은 volume으로 해보세요. 

꽃개구리Kozmoj  |  2009.07.21   
Sonication 으로 Cell 이 다 깨어졌는지의 여부를 확인하는 방법 중 하나로
현미경 관찰을 해 볼 수 있습니다.
실험실에 현미경 (학생 실험용도 좋음) 이 있으면
slide glass 에 sonication fluid 를 조금 올려 관찰해 보세요.

cell 이 둥둥 떠 다니면서 꿈틀거리면 아직 덜 된겁니다.
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