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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 20138  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 GAPDH와 Actin의 차이
올챙이궁금자  | 2009.06.18 16:55

수고하십니다..
좀 초보적인 질문드립니다..

실험을 할때 정량의 기준으로
B-actin, GAPDH, α-tubuline등을 사용하는 논문이 많은데...
각각 언제 어떤데 골라서 사용하면 되나요?

western에도 B-actin, GAPDH을 쓰기고 하고
pcr에도 B-actin, GAPDH을 쓰기도 하는데..

정량의 기준을 가장 잘 알기 위해선 어떤때 어떤것을 사용해야 하나요?

저는 주로 protein 을 확인할때는 actin을 사용했고,
RNA를 볼때는 주로 GAPDH를 사용했는데..

이유도 모른체 실험만 했었는데..이젠 이유를 좀 알고 싶네요,,ㅎㅎ

기준이 있는 것인지..가르쳐 주세요,,

너무 초보적인 질문이지만 답변 부탁드립니다.

#GAPDH
 
#Actin
 
#정량의 기준
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리Baltimore  |  2009.06.18   
House keeping gene은 아무것이나 골라 쓰면 됩니다

기존의 사용하던것이면 그냥 사용하면 됩니다

단 특이적으로 그 사용을 달리 해야 할때가 있습니다

예를 들면 어떠한 처리물질이 cytosol내의 actin을 건드리는 녀석이면 actin을 loading control로서 사용하면 안되겠죠

따라서 이때에는 GAPDH나 다른것을 사용해야 합니다

이처럼 모든 세포에 늘 발현하는 House keeping gene이라 할지라도 그 사용용도가 loading control에 지나지 않지만

때에 따라서는 변할수 있다는 것입니다 ^^
개구리하늘을달려라  |  2009.06.18   

저는 PCR할때는 actin과 GAPDH를 annealing temp를 다르게 짜놓고 보고자 하는녀석의

온도와 비슷한넘을 쓰구요...

western할때는 reprobing을 하실생각을 하신다면 액틴과 튜블린중에서

size가 되도록 않겹치는놈을 씁니다.

개구리west  |  2009.07.01   

윗분들의말씀처럼 house keeping gene 이면 아무거나 사용해도됩니다
허나 무조건 actin이다~라고 보시면 안되고
예를들면 Protein 쪽을 보실때
total protein 쪽을 보실때는 상관이 없을지 모르지만
cytosol, nuclear 를 구분해서 보실경우에는 이야기가달라집니다
actin 의 경우 cytosol에 있기때문에
만약 nuclear쪽을 보실때 actin을 사용하면 안되겠지요
그럴경우에는 histone을 보는 경우가 있습니다
histone H1,H2A,H2B,H3, H4 그렇게 5가지가있는것으로 알고있습니다
5가지가 구분없이 다 봐도 상관없는지는 저도 잘모르겠지만
H2B를 본 논문은 봤습니다..
저도 얼마전에 알아서 그리 자세히는 말씀드릴수가 없네요
저도 님처럼 PCR할때는 GAPDH .western 할때는 actin 위주로봤는데
western에서 GAPDH를 한 것도 보기도 했습니다.

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