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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot에서 actin사진
구슬이  | 2009.06.11 17:53
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

western blot assay를 하면 actin경우는 다른 샘플 protein보다 발현량이 많잖아요.
제가 보고자 하는 protein은 현상시간을 15분을 뒀어야 밴드가 잘 보였는데요, 이 때 actin 밴드는 엄청 두껍게 나왔어요.잡 밴드도 위아래로 뜨구요. actin밴드도 이쁜 밴드를 얻으려고 30초만 놔 뒀거든요.(이때는 원하는 밴드가 하나도 안 보였구요)
이럴 경우, 논문에 그 그림을 넣으려면, actin이 두껍게 나왔을지라도 sample protein과 현상시간을 동시에 했던 그림을 넣어야 하나요? actin과 굳이 상대비교를 할 것이 아니니까 현상시간을 다르게 한 걸 사용해도 되나요?   

#western blot
 
#actin
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리얕은지식  |  2009.06.11   

현상시간이 길면길수록 밴드는 두껍게 나오고

그것으로 인해서 단백질양의 차이를 보기가 어려울경우도 있습니다.

액틴을 보는 이유는 같은 양의 단백질로 실험을 했는지에 대한 증명으로

어느정도 샤프한 밴드가 이상적이라고 생각되어지네요.

원하시는 단백질의 밴드와 actin의 현상시간은 같지 않아도 상관없습니다.

구슬이  |  2009.06.11    
그렇군요..빠른 답변 정말 감사드립니다 ^^
알다빈치  |  2009.06.11   
대답은 현상시간이 다른걸 사용합니다. western blot assay는 각 sample간에 상대적인 protein band의 intensity를 비교하는 실험입니다. 따라서 같은 Ab로 발광된 밴드들간에 비교해야 합니다. 왜냐면 간단히 말해서, 우리가 사용하는 각각의 Ab들은 mono- 또는 polyclonal Ab, Host도 mouse, rabbit 또는 goat등 다양합니다. 더욱이 파는 Ab들은 농도 또한 서로 다르고, 같은 protein을 잡는 여러종류의 Ab간에 specificity도 다릅니다. 그래서 dilution도 중요한 변수지요. 결국 Actin에서 깨끗하게 찍어서 서로 비슷한 loading양을 보인다고 주장할 수 있는 결과를 얻으면 사용할 수 있습니다.
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