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질문 actin관련 실험하신분 답변 부탁드려요!!
actin  | 2006.07.10 08:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
actin depolymerization실험 해보신분께 문의 드립니다.
제가 actin관련 실험을 처음 시작해서 잘 몰라서 문의 드려요.
논문에 보니까 actin depolymerization실험을 많이 하던데.
sedimentation assay를 actin과 cofilin1, AIP1 등을 같이 down하더라구요.
여기서 cofilin1이나 AIP1등의 protein은 E.coli에서 expression시켜 purify해서
사용하는것 같던데요.
actin protein은 어떻게 얻는지 모르겠어요.
똑같이 E.coli에서 expression해서 얻는지, 아니면, mammalian에서 expression해야는지, 아니면, cell에서 직접 추출하는건지.. 가르쳐 주세요.
그리고, actin을 G-actin(monomer)상태를 tube에서 polymerization buffer를 넣고
in vitro로 polymerization시키던데, 그 방법도 좀 가르쳐 주시면 감사하겠습니다.
그럼 모든 분들 실험 잘 되시길 바래요.
#actin
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
Mad Scientist  |  2006.07.10    
Actin 자체는 상당히 abundant 한 단백질이라 동물 근육 등에서 그리 어렵지 않게 정제하여 사용하는 것으로 알고 있습니다. Rabbit Muscle Actin 이면 당연히 토끼고기 (-.-;;) 에서 정제한 것이겠죠.

Sigma 에서 아마 여러 생물 유래의 actin 정제해 둔 것을 판매하는 것으로 알고 있습니다.

사실 E.coli 에서 Recombinant Protein 을 만들어서 정제하는 것은 보다 손쉽게 정제를 하기 위한 목적이고, actin 과 같이 그다지 어렵지 않게 값싸게 얻을 수 있는 단백질이라면 굳이 E.coli 에서 overexpression 같은 것을 할 필요가 없죠.(오리지널을 쉽게 얻을 수 있는데 왜 굳이 짝퉁(?)을 만들겠습니까) actin binding protein 이라면 그렇지 않으므로 E.coli 에서 발현시켜 정제를 하겠지만..

옛날에 들은 이야기인데, 지금은 국내에 돌아오셨지만 NIH에서 한때 날리셨던 모 박사님이 Phospholipase C 를 처음 Purify 하실때 도살장에서 얻은 소 눈을 수만개를 사용하셨다죠..그만큼 옛날에는 Protein Purification 이라는 것이 어려웠었답니다. 요즘은 여러가지 affinity tag 도 좋은 것이 많이 나왔고, E.coli 에서 간단히 expression 할 수 있으므로 protein work 이 쉬워진 셈입니다만.
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