실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Southern Blot
dpn1 enzyme 처리시..질문입니다
레벨2 석사초년생
southern을 하기 위해 plasmid dna 를 추출해서 RE처리하고 있습니다...
도저히 결과가 안나오고 문제해결은 안되서 답답한 마음에 글을 씁니다
의심되는 많은 step 중에 한가지...
double enzyme 처리를 하고 전기영동을 하는데요..
EcoR1 과 Dpn1을 같이 처리해 보신 분 계신가요..??
EcoR1이 버퍼 조성 영향을 거의 안받아서 Dpn1 버퍼와 같이 쓸려고 합니다..
plasmid 총 양은 10ug 정도 되고,..enzyme reaction total volumn은 30으로 하려고 합니다..
시간은 얼마가 적당한지...효소 양은 어느정도가 적당한지 경험있으신 분들 좀 알려주세요
다른 enzyme으로 하다가 바꿔서 한번 해볼려구요
그리고 또..동물세포에서 페놀/클로로 이용해서 plasmid 추출하는데 상층액만 조심스럽게
뽑아야 되잖아요..그 때 혹시 뭔가 노하우가 있으면 좀 알려주세요
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