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질문 그람양성균 DNA추출실험을 하려고 합니다.
 | 2009.04.30 16:59
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
그람양성균 DNA추출실험을 하려고 합니다.

그람 음성균 DNA추출실험은 SDS처리한 후, PCI를 첨가하는 과정으로 이어지는데

그람 양성균은 세포벽을 처리해야하기 때문에 SDS처리전에 lysozyme 처리 과정이 필요하다고 합

니다.

그 과정이 구체적으로 어떤 과정이 필요한지 전혀 찾지를 못하겠더라구요.

lysozyme처리실험과정 가르쳐 주세요

부탁드립니다.~


#그람양성
 
#DNA
 
#lysozyme
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리미맹  |  2009.05.07   

SDS 첨가하는 부분까지 프로토콜 첨부합니다.

 

1. 15 ㎖ 세포배양액으로부터 cell pellet 회수

 

2. TES buffer cell pellet wash(TES buffer에 현탁시켜 원심분리 한 다음 상층액은 버림)한다. 2회 반복하여 배지성분과 세포벽의 이온을 제거시켜 cell lysis를 쉽게 한다.

 

3. Lysis buffer 1 ㎖에 cell pellet을 현탁한 다음 37℃에서 cell lysis 될때까지 incubation한다. Lysis가 일어나면 세포현탁액의 점도가 커지고 시간이 지나면 층분리가 일어난다.

 

4. 0.25 M EDTA 1 ㎖ 첨가하고 상온에서 5분간 방치한다
 

5. 20% SDS 용액을 400 ㎕ 첨가하고 65℃에서 액이 맑아 질 때까지 배양한다.

 

TES buffer

50 mM NaCl

30 mM Tris-HCl [pH 8.0]

5 mM EDTA

lysis buffer

25% sucrose                      ㅣ

50 mM Tris-HCl [pH 8.0]    ㅣ   + lysozyme (20/)*   
   1 mM EDTA                         ㅣ

(Staphylococcus aureus는 lysozyme대신 lysostaphin사용)

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