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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 단백질 정제후 dialysis 과정
정제초보  | 2009.04.22 22:30
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)


E.coli에서 발현시킨 protein이 inclusion body  로 생성되는 것을 확인하였고,

8M urea를 사용해서 단백질을 danaturation  시켜준후,

affinity chrimatograpy를 사용하여 정제하였습니다.

정제를 하는 과정에서 urea 를 제거해주고, 결국 soluble 한 단백질만 얻어냈습니다.

Dialysis를 통해서 salt 를 제거해주었습니다.

그리고 SDS-PAGE로 확인해보니, 제 사이즈의 단백질이 거의 남아있지 않았습니다.ㅠㅠ

Dialysis 과정중 aggregation 된 단백질도 없었구요.ㅠㅠ

아무리 생각해도 이유를 모르겠어서 질문드립니다.

알려주세요. ㅠㅠ
#단백질
 
#정제
 
#dialysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리홍주호  |  2009.04.23   
단백질 정제 각 단계마다 aliquot해서 PAGE로 확인하시면 어느 단계에서 손실이 발생했는지 알 것 같네요. 질문에서처럼 Dialysis과정에서 손실이 있을 것으로 생각되신다면, chromatography에서 얻은 eluate를 바로 걸어보면 답이 나올 것 같습니다.

보통 dialysis에서 손실이 되는 경우로는,
- membrane에 흡착
- aggregation
정도가 있습니다.
꽃개구리TX  |  2009.04.23   
urea를 제거하고 soluble 단백질을 얻었다고 하셨는데 어떻게 확인하셨습니까?

SDS-PAGE에서 확인하셨습니까?

밴드가 보인다고 제대로 refolding됬다고 볼수 없습니다...

그리고 Dialysis에 사용한 tube의 MWCO 값을 확인하셨는지요?
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