실험 Q&A Immunology > Antibody
IHC 결과가 안나옵니다ㅜㅜ
레벨1 초초보연구 (대학생)
안녕하세요 지금 IHC-P 실험을 하는데 결과가 안나와서 질문 드립니다.
제가 랩실에서 배운 protocol대로 하고 있는데 DAB 염색 하고 결과를 봤을 때 결과가 안나와서 답답할 따름입니다ㅜㅜ
사수선생님이 말씀하시길 1차 anti가 붙지 않아서 염색이 안되는거 같다고하는데 어디서부터 바꿔나가야할지 막막합니다
우선 제가 사용하는 1차 안티까지 붙히는 방법은
1. slide 60도 1hr heating
2. xylene 5회*5min ->EtoH 100~70% 5min
3. DW washing 1~2min
4. EDTA retrieval pH9.0 heat 10min -> on ice 1hr
5. TBS-T 10min * 3회
6. blocking buffer 1hr
7. TBS-T 10min 3회
8. 1st anti(a-SMA) 1:200 4도 overnight
여기서 잘못된 부분이나 바꿔서 진행 할 부분이 있을까요?
고수님들 부탁드립니다..
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