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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 PCR 후 전기영동 결과 오류 원인이 무엇일까요?
알Jipgagoshipda(대학생)  | 03.30 21:41
첨부파일 파일첨부: 전기영동.jpg (119 KB)
이미지 첨부파일
Taq DNA polymerase를 발현 및 정제하고 이를 이용하여 pcr과 전기영동을 진행하였습니다. 정제한 taq의 농도를 serial dilution하면서 총 5개의 샘플을 만들고 전기영동을 진행하였는데 가장 결과가 진하게 나와야할 1x에서는 아무런 결과가 나오지 않고 1/4x와 1/16x 샘플에서만 dna가 발현되었습니다. 아무리 오류의 원인을 생각해봐도 마땅한 이유를 찾지 못하여 질문을 올립니다. 혹시 원인이 무엇일까요?

사진 상에서 오른쪽 결과입니다.
참고로 왼쪽의 결과와는 taq polymerase를 제외한 나머지 화학품(primer, buffer 등)은 동일한 master mix를 사용하여 실험을 진행하였는데 왼쪽 결과는 제대로 나오고 오른쪽만 이상하게 나온 것이 의문입니다.
#전기영동
 
#PCR
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알미니이리  |  03.31 09:20  

Taq DNA polymerase 정제 후에, dilution 용 solution과 동일한 조성으로 buffer change가 됐나요?

혹시 buffer change가 안된거라면, 정제과정 중의 final solution (elution buffer?)이 Taq polymerase의 활성을 저해하는 건 아닐까 하는 생각이 드네요.

만약 맞다면, 1/4x 부터 충분히 희석되어 활성이 나타나는것 같습니다.

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