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 전체 > Molecular Biology-RNA > mRNA Analysis
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질문 realtime pcr 결과가 나오지 않아요 ..
알뱌뱌뱌뱌(대학생)  | 03.30 19:25

멜팅 커브는 뜨는데 ct값이나 amplification plot이 전혀 보이지 않아요 

 

2x pcr master mix 10 ul 

cdna sample (합성 후 10배희석) 2 ul 

primer (R와 F를 1:10으로 희석한 후 master mix를 만들어서 사용) 1 ul 

dw 7 ul 

이렇게 했는데 결과가 몇 주째 나오지 않네요 .. 

 

#qpcr
 
#realtimepcr
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리실험조아  |  03.30 20:46  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

house keeping gene도 안나오나요?

혹시 그렇다면 cDNA가 잘 만들어졌는지부터 체크해 보셔야 할듯 싶습니다.

알뱌뱌뱌뱌  |  03.31 09:01  

그래서 그냥 gel에 걸게 되면 밴드는 보이더라구요 .. 이런경우에는 어떡해야하나요 ? 

개구리실험조아  |  03.31 09:13  

그래서 그냥 gel에 걸게 되면 밴드는 보이더라구요 .. 이런경우에는 어떡해야하나요 ? 

real time PCR하시기 전에

cDNA가 잘 만들어졌는지 먼저 house keeping gene으로 일반 PCR 먼저 돌려보시고 band가 잘 뜨는지 확인 해 보는 것이 좋은데 그렇게 해 보셨다는 뜻인가요?

시간이 허락한다면 발현 보시고자 하는 유전자의 primer로도 먼저 일반 PCR로 확인해 보는 것이 Primer가 잘짜졌는지 확인할 수 있어 좋습니다.

앞다리LCK BD&FAS  |  03.31 10:06  

ThermoFisher Brand Applied Biosystem(PCR,Real Time PCR,CE,NGS,MicroArray) 국내 공식 대리점인 LCKTechnologies 입니다.

Real Time PCR에서 Melting을 보셨다니 SYBR Green을 PCR Mix를 사용 하셨을 것 같습니다.

혹시 사용하신 장비는 어디 제품 일까요?

만약 ThermoFisher의 Applied Biosystem의 장비이면 실험 진행 file(.eds)를 FAS@lcktech.co.kr로 전달 주시면 확인 후 연락 드리도록 하겠습니다.

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