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질문 전기영동에서 band가 어떤걸 의미하나요?
알솜이언뉘(대학생)  | 03.25 12:18

blue-white screening 실험을 하고, 각각의 white colony와 blue colony에 primer와 Taq polymerase, dNTP, F.R primer, DW를 넣고 PCR을 진행하였습니다.

blue colony의 경우 plasmid에 insert DNA가 들어가지 않아 생긴것이고, white colony의 경우 plasmid에 insert DNA가 들어가 생겼는데 왜 전기영동 결과 white colony에서는 band가 확인되고, blue colony의 경우 band가 확인이 되지 않는건가요?

전기영동에서 보이는 band에는 insert DNA 외에도 plasmid DNA가 있으니 white colony 뿐만아니라 blue colony도 band가 보여야 된다고 생각합니다...

 

1. 전기영동 결과 보이는 band는 앞서 말한 DNA를 모두 다 포함하고 있는건가요?

2. 왜 white colony를 전기영동하면 band가 보이는데, blue colony를 전기영동하면 band가 보이지 않는건가요?

 

감사합니다.

#blue-white screening
 
#plasmid
 
#insert DNA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  03.25 13:32  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

클로닝 실험에서 PCR로 확인하는 것은 transformant colony가 insert를 포함하는 plasmid를 가지고 있는지 확인하는 단계입니다.

white colony 여러개와 blue colony 하나를 따서 PCR 을 하지요.

이때 사용하는 PCR primer는 insert를 증폭할 수 있는 primer입니다. 그래서 plasmid에 insert가 들어간 colony에서만 증폭된 DNA 밴드가 보입니다.

개구리차몬드  |  03.31 11:27  

사용한 primer가 insert의 primer라면

insert가 들어간 colony에서만 증폭이 되어 band가 나올 것입니다

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