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질문 blue-white screening 실험에서 전기영동을 하는 이유가 뭔가요?
알솜이언뉘(대학생)  | 03.24 20:28

저번 실험에서 t-vector와 ligation을 해서 새로운 vector를 만들었습니다.

그 vector에 insert DNA가 잘 들어갔는지 확인하는 실험을 했습니다.

Colony에서 white와 blue colony를 각각 넣은 pre-mix를 PCR 진행해주었는데, PCR을 진행하는 이유가 뭔가요?

그리고 white colony를 넣은 pre-mix를 전기영동해주면, band가 나오는데 blue colony를 넣은 pre-mix를 전기영동해주면, band가 나오지 않더라구요

만약 insert DNA가 삽입이 되면 lacZ가 발현되지 않아 b-galactosidae가 분비되지 않아 x-gal이 분해되지 않아 white colony가 생성 되는 것까지는 이해가 되는데 왜 전기영동시 band가 나오지 않는건가요?

#blue-white screening
 
#lacZ
 
#Colony PCR
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리실험조아  |  03.24 21:52  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
blue-white screening은 1차적으로 vector에 DNA가 insert 되었는지를 확인합니다.
잘 아시다시피 insert된 경우는 콜로니가 흰색이고 그렇지 않은 경우는 파란색이라고 육안으로 확인하죠.

PCR은 이를 다시 분자적 관점에서 확인하기 위함입니다. 흰색은 해당 유전자가 들어 있으므로 pcr되어 밴드 형태로 보이고 파란색은 들어있지 않으므로 당연히 밴드가 안뜹니다.

하지만 흰색으로 보여도 더 기르다 보면 파랗게 변하는 경우도 있고, 아주 낮은 가능성으로는 엉뚱한 DNA가 들어가는 경우도 있어서 후속으로 다른 확인법이 필요합니다.
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