실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
RT-qPCR 질문
레벨1 구움과자 (대학생)
안녕하세요, RT-qPCR 결과가 자꾸 이상하게 나타나서 질문 드립니다.
primer는 계속 사용해오던 것을 사용해서 primer문제가 아닌 듯 하구요..
이전까지 결과가 이상한 적이 없었는데 최근에 PCR 돌렸을 때 melting curve 자체가 안뜨는 것처럼 나옵니다.
이전과 달라진 점이라면 한 sample로 여러 개의 gene을 봐야하는데 samle이 너무 많아 한 plate에 다 돌릴 수가 없어서 cDNA 1ul (1ug) + ultra pure water mix를 충분히 만들어 놓고
mix+primer+SYBR green 넣고 돌리고,
끝나면 똑같이 만들어 놓은 mix+primer+SYBR green 넣고 돌리고 이렇게 했습니다..
mix는 ice에 계속 박아둔 상태로 사용했는데
첫 번째 plate에서 본 GAPDH는 잘 나왔는데 그 다음 plate에서 부터는 smaple마다 melting curve가 잘 뜨는 sample이랑 안뜨는 sample이랑 섞이기도 하고.. 엉망 친창으로 나옵니다.
mix를 한꺼번에 만들어서 사용해서 cDNA가 degradation 되거나 해서 그런걸까요...?ㅜ
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