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 전체 > Immunology > ELISA
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질문 3T3-L1 cell : cAMP ELISA측정시 시약처리 및 샘플링방법<급해요ㅠ.ㅠ>
엔도  | 2009.04.15 16:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요~ 저는 3T3-L1 을 가지고 실험하고 있습니다.

분화메디아(Dexa, Insulin, IBMX)를 넣어주면 cAMP가 activation되는 것으로 알고 있습니다.

이때 PDE inhibitor인 IBMX의 작용때문인것으로 압니다.

그래서 직접 cell에 MDI를 준 후 cAMP를 ELISA Assay로 측정했습니다.

다른 논문을 보니 cAMP를 activation시키는 약물을 주면 cAMP가 몇십배 증가하더라고요

그런데 저는 고작 2~3배 증가했지 뭡니까~ ㅠ.ㅠ

분화메디아를 주고 15분, 30분, 60분 후에 샘플링했고 kit는 amersham(RPN2251 : non-acetylation)제품을 사용했습니다. 

약물 주고 초기 30분안에 activation되고 바로떨어진다고 들어서 시간은 이렇게 정했습니다.

샘플링 방법은 kit의 lysis regent를 이용했고요~

측정해 보신 분들께 조언을 구하고 싶습니다. kit하나 날려서 너무 우울합니다.

#cAMP
 
#3T3-L1
 
#ELISA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리juno  |  2009.04.16   
님께서 들이신 노력이 아까워서 우울해 하신다면 모를까 Kit 날린거 가지고 우울해 하지 마십쇼.
그리고 고작 2~3배라고 하셨는데 그 결과가 통계적으로 유의미 하다면 의미가 있는 것입니다.
실제 3T3-L1에서 MDI를 준다고 그렇게 큰 induction을 바라시기는 어렵습니다. 그럼에도 불구하고 PKA activation을 분명히 관찰할 수 있으실거라고 봅니다. 
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